花生叶片DNA快速提取方法的优化.pdf

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1、山东农业科学2014，46(7)：11～14ShandongAgriculturalSciences花生叶片DNA快速提取方法的优化王蕾，赵新涛，许梦琦，宿烽，任艳，李双铃，石延茂，袁美，王传堂(1．青岛科技大学化工学院，山东青岛266042；2．山东省花生研究所／农业部花生生物学与遗传育种重点实验室，山东青岛266100)摘要：以花生幼叶为试材，对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。结果表明，与其他3种改良方法比较，改良TPS法具有不需

2、液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点，提取的DNA可用于花生SSR分析。关键词：花生；基因组DNA；提取方法；幼叶中图分类号：$565．201文献标识号：A文章编号：1001—4942(2014)07—0011—04OptimizationofRapidDNAExtractionMethodsfromPeanutLeavesWangLei，ZhaoXintao，XuMengqi，SuFeng，RenYah，LiShuangling，ShiYanmao，Yuan

3、Mei，WangChuantang(1．ChemicalEngineeringCollege，Qi~gaaoUniversityofScienceandTechnology，Qingdao266042，China；2．ShandongPeanutResearchInstitute~KeyLaboratoryofPeanutBiologyandC．enet~Improvement，MinistryofAgriculture，Qingdao266100，China)AbstractWiththeyou

4、ngleavesofpeanutasexperimentmaterial，fourdifferentDNAextractionmeth-ods，thehigh—throughputDNAextractionmethod，thesimpleSDSmethod，TPSmethodandTENPmethod，werecomparedandoptimized．Theresultsshowedthat，comparedwiththeotherimprovedmethods．theim—provedTPSme

5、thodhadtheadvantagesofgrindingsampleswithnoliquidnitrogen，fasterextractionrate，fo-werkindsofreagent，lowercost，rapiderDNAsolutionrateandbetterDNAquality．TheDNAextractedthroughimprovedTPSmethodcouldbeusedforSSRanalysisofpeanut．KeywordsPeanut(Arachishypo

6、gaeaL．)；GenomicDNA；Extractionmethod；YoungleavesDNA是遗传信息的载体，DNA的提取是分子法。进行改进和创新，力求寻找一种DNA质生物学研究的基础。植物总DNA的提取方法主量和纯度相对较好、可用于SSR分析的快速简便要有CTAB法[、高盐低pH法．3J、SDS法等。的花生DNA提取方法，用于花生的遗传多样性分近年来，许多研究人员根据不同的植物和不同的析、遗传图谱构建及分子标记辅助选择等研究。试验要求对传统的DNA提取方法进行改进和创1材料与方法新，取得

7、了较好的效果J，但这些方法存在步骤繁琐、有机溶剂残留导致污染以及对人体造成危1．1试验材料害等缺点。以花生品种“四粒红”的叶片为材料，由山东李庆云等研究发现，从花生不同部位提取省花生研究所提供。DNA时，叶片的DNA产率最高。本研究对花生、1．2DNA提取方法小麦、玉米等植物叶片的4种DNA提取方分别对高通量DNA提取法、SDS简易收稿日期：2014—03—02基金项目：山东省博士基金(BS2011NY014)；留学人员科技活动择优资助项目(2011)；国家科技支撑计划(2011BA35B04)；

8、“863”子课题(2013AA102602)作者简介：主蕾(1987一)，女，硕士研究生，研究方向为细胞生物学。E—mail：271469015@qq．corn通讯作者：袁美(1972一)，女，研究员，主要从事花生生物技术育种研究。E—mail：yuanbeauty@126．coml2山东农业科学第46卷法、TPS法以及TENP法m四种简便的DNA入等体积预冷的无水乙醇，轻轻上下颠倒混匀，提取方法进行改良及优化，方法如下。置一20℃冰箱中10rain，待析出沉淀，120001．2．