临床医学毕业论文耳叶牛皮消颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠p53及pcna蛋白表达的影响

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1、耳叶牛皮消颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠P53及PCNA蛋白表达的影响姓名：2014年6月25日耳叶牛皮消颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠p53及PCNA蛋白表达的影响作者：何行玲，彭传芬，黄祖明，郭莲军【摘要】目的观察耳叶牛皮消颗粒对实验性慢性蒌缩性胃炎（CAG）大鼠p53基因及增生细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法采用热盐水灌胃方法制作CAG动物模型，以不同剂量的耳叶牛皮消颗粒进行治疗后，用免疫组化法检测大鼠胃黏膜p53及PCNA蛋白的表达。结果经过热盐水灌胃造模后，大鼠胃黏膜腺体萎缩。以耳叶卞皮消颗粒治疗盾，大鼠胃黏膜腺体萎缩明显减轻，胃黏膜细胞p53阳性表

2、达率和PCNA标记指数显著降低。结论耳叶牛皮消颗粒治疗CAG的机制可能是通过抑制突变型p53基因及PCNA蛋白的表达，从而恢复细胞增殖与凋亡的平衡来实现的。【关键词】耳叶牛皮消颗粒；慢性萎缩性胃炎；p53；PCNA慢性萎缩性胃炎（CAG）是消化系统疾病治疗屮的难点之一，属于癌前病变，对人类健康威胁较大。M•叶牛皮消CynanchumauriculatumRoyleexWight为萝蘼科鹅绒藤屈植物，是广泛分布于四川、湖北等地的常用草药，具冇养阴补虚、健脾消食之功效。笔者经研究发现，耳叶卞皮消能明显提高小鼠的小肠推进功能［1］。进一步以耳叶牛皮消、黄述、枳

3、实、闩术、三七等中药制成耳叶牛皮消颗粒，并观察Y其对CAG大鼠胃黏膜p53及PCNA蛋白表达的影响。现报告如下。1材料1.1动物清洁级SD大鼠，体质量（200±20）g,由华屮科技大学同济医学院实验动物中心提供（动物生产许可证号：医动字第19-025号）。1.2药物与试剂耳叶牛皮消颗粒由本院制剂室制备，批号：20070819,处方组成为耳叶牛皮消、黄连、枳实、党参、白术、茯苓、三七、白芍、法半夏、甘草、干姜，临用吋用蒸馏水配制成合适浓度的混悬液。抗P53单克隆抗体(DO-1),由北京中山生物技术有限公司提供；PCNA单克隆抗体和LSAB试剂盒,由DAKO

4、公司(曰本)生产。2方法2.1模型制作及给药方法取健康SD大鼠110只，随机分为5组，每组22只，即正常组、模型组和耳叶牛皮消高、中、低剂量组。除正常组外，其余各组均采用热盐水灌胃方法制作CAG动物模型［2］。即用55°C的15%氯化钠溶液灌胃，1次/d，每次2.5ml，共12周。实验开始，先处死5只正常组大鼠，并留取胃大体标本作为对照，以后各组每2周处死2只大鼠，取g标本进行病理检查，以观察g黏膜萎缩情况，判断造模是否成功。从第13周开始灌服药物治疗，至第24周末结束。其中耳叶牛皮消高、中、低剂量组分别予耳叶牛皮消颗粒相当于原生药5,2.5和1.25g

5、kg-ld-1灌胃，正常组和模型组予等量蒸馏水灌胃。2.2检测指标及方法各组实验结束将人鼠断头处死后剖腹取全胃，沿人弯剖开，生理盐水漂洗摊平作大体观察，沿胃小弯条状取材。胃黏膜标木经10%甲醛液固定，石蜡包埋切片。免疫组化采用链霉素抗生物素蛋D-过氧化酶连接法(s-p),按试剂盒内说明书操作。阳性对照为已知阳性组织切片在同一条件下反应，阴性对照以正常兔血清代替第一抗体。结果判断标准参考文献［3］。P53结果按如卜*方法进行评分:①阳性着色程度：无着色为0,浅着色为1,深着色为2;②阳性着色范围：无着色为0,着色小于1/3为1，着色大于1/3为2,弥漫性着

6、色为3。然后将以上W项评分和加，结果大于或等于三者为阳性病例。PCNA结果用PCNA标记指数(LI)表示：LI=PCNA阳性细胞数/计数细胞总数xlOO%。在高倍镜十'选取5个宥代表性的视野，每个视野记数100个细胞，计算PCNA阳性细胞表达率。2.3数据处理采用t检验和X2检验，SAS统计软件计算机处理。3结果p53阳性着色位于细胞核，呈棕黄色颗粒状，各切片显色分布不均，以片状和局灶性为主，少数为弥漫性分布。见图1。PCNA阳性着色位于细胞核，呈棕黄色细颗粒状。见图2。CAG模型大鼠在给予耳叶牛皮消颗粒治疗后，P53阳性表达率和PCNALI明显降低。其

7、屮耳叶牛皮消高、屮剂量组p53阳性表达率明敁低于模型组(P0.05),耳叶牛皮消各剂量组PCNALI妞著低于模型组(P0.01或P0.05)。见表1。表1各组大鼠g黏膜p53及PCNA蛋白的表达比较(略)4讨论正常胃黏膜细胞的增生与凋亡维持着细胞总数的平衡，这种平衡的失调在CAG到胃癌的发展过程屮起重要作用。细胞凋亡受众多基因调控，其屮p53基因是与人类肿瘤发生相关性最高的突变基因，位于17号染色体短臂上，对细胞的生长有重要的调节作用。野生型p53基因能阻止具冇癌变倾A的突变细胞出现，但它很容易转变成突变型P53基因而丧失调节功能，导致细胞恶性增生［4］

8、。野生型p53基因表达的蛋白半衰期甚短，一般检测方法难以检出，而当基因发生突变时