九龙江水大肠杆菌群测定的实验报告1

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1、林淑丽（漳州师范学院10级生物系食品科学与工程101304116）摘要：木文通过多管发酵法、革兰氏染色法两种不同的方法测定九龙江水大肠杆菌群数量。初步掌握多管发酵法及革兰氏染色法。了解大肠杆菌在饮水中的重要性和革兰氏染色原理在细菌分类鉴定的重要性。多管发酵法大肠杆菌九龙江水革兰氏阴性无芽孢杆菌THEDETERMINATIONOFCOLIFORMBACTERIAWHICHINTHEJIULONGRIVERLinShuli（lOFoodscienceandengineeringinBiologydepartment,ZhangzhouNormalUniversity101304116）Abs

2、tract:thisarticlethroughmultipletubefermentationandgram’sstainingmethodtwodifferentmethodstodeterminetheKowloonriverescherichiacoligroupofquantity.Preliminarygrasptubefermentationandgram’sstainingmethod.Understandtheimportanceofe.coliindrinkingwaterandgramstainprincipleintheimportanceofbacteriacl

3、assificationandidentification.Keywords:muchtubefermentation;E.Coli;thewaterofJiulongRiver;gram-negative;sporelessbacterium大肠杆菌（学名：Escherichiacoli,通常简写为E.coli））是生活在温血动物（包括鸟类和哺乳动物）大肠中的重要细菌种类，对食物正常消化具有重要作用。技术上，大肠菌群被定义为一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，可利用乳糖在48小吋内35°C之下产生气体的杆菌。在水净化和污水处理领域，大肠杆菌很早就被选作水污染

4、程度的指示性物种，标志着有多少人类粪便存在于水中，其测量标准为大肠菌群指数。故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。大肠杆菌也常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。1材料与方法1.11.1.11.1.2试验菌株培养与培养基的制备试验菌株大肠杆菌培养基的配制与培养条件培养温本实验所用培养棊采用乳糖胆盐蛋G胨培养基和伊红美蓝琼脂培棊度:37V,培养时间：1-2天，常压空气下培养。操作步骤1.2.1多管发酵1.水样的采集：用高温灭菌过的试剂瓶到九龙江取水，将瓶子连瓶盖一起伸到10-15厘米的深处打开瓶塞，等水满后盖上盖子后从水屮取出。运送水样时应避免玻

5、璃瓶摇动，水样溢出后又流回瓶中，从而增加污染。2.水样的稀释：将灭菌的三根小试管标上1、2、3的记号，各装4.5ml的无菌。充分振荡水样，从中吸取0.5ml于1号试管中，，充分振荡既得1:10的稀释液。同理配置2,3号试管1:100,1：1000的稀释液。3.水源水的检查（1）初步发酵试验:有50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵瓶中，加入50ml水样（轻度污染水的测定）；在1支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨的大发酵管中，加入10ml水样（轻、中度污染水的测定各一支）。（2）从原水样、1:10，1:100，1:1000的稀释液各吸取lml于四支经过灭菌的装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨中。（每吸取一

6、次，吸头都要换一次）（3）将上述熔液混匀后，于36摄氏度培养24h,24h未产气的继续培养至48h。记录其稀释液的产气管数（如图表一），进行复发酵试验。（4）平板分离:经24h培养后，将产酸产气及48h产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37"C下培养18-24h，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。（5）复发酵试验：经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阳性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的男一部分，重新接种于普通浓度的乳糖胆盐蛋0胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1-3个，37°C培养24h,结果若产酸又产气,即证实有大肠菌群存在。证

7、实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表，即得大肠菌群数。1.2.2革兰氏染色1.制片(1)涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中间加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片,制成很薄的涂面，注意取菌不要太多。(2)晾干：让涂片在酒精灯火焰上方文火烘干。(3)固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜)注意：①要用活跃生产期的幼培养物做革兰氏染色；②涂片用的载玻片要洁浄无油污迹，否则影响涂片。③挑菌量应少