九龙江水大肠菌群的测定

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1、九龙江水大肠菌群的测定摘要：本文依据统计学原理及大肠杆菌的特性来测定九龙江水中是否含有大肠杆菌，并测定其含量有多少。关键词：大肠杆菌发酵革兰氏染色TheassayoftheJiulongRiver’swater’sEscherichiacoliAbstract：Accordingtothestatistics’principleandthecharacteristicsoftheEscherichiacoliindifferentconcentrationstoassaywhetherthewateroftheJiulongRiverhasth

2、eEscherichiacoliandhowmuchtheyare.Keywords:Escherichiacoli;ferment;Gramstain大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。1材料与方法1.1实验材料与培养基1.1.1实验

3、材料试管、吸头（1mL、5mL）、量筒、玻棒、烧杯、培养皿、水浴锅（箱）、培养箱、显微镜、锥形瓶、接种环、干燥箱、汉德氏管、高压灭菌器、单道移液器、电子分析天平1.1.2培养基乳糖胆盐蛋白胨培养基伊红美蓝琼脂（EMB）培养基1.23倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨液体培养基的配制1.2.1材料乳糖30g蛋白胨60g0.04%溴甲酚紫水溶液75mL胆盐15g蒸馏水1000mL1.2.2配制方法将上述培养基成分加热溶解于1000mL蒸馏水中后，调pH7.2~7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，充分混匀，分装于置有杜汉氏小管的试管内。115℃灭菌15m

4、in。1.3伊红美蓝琼脂（EMB）培养基的配制1.3.1材料伊红美蓝琼脂（EMB）37g1.3.2配制方法称取37g的EMB加1000ml的蒸馏水，加热溶解后分装于三角锥形瓶中，于LDZX-40B1不锈钢立式灭菌消毒器控制116℃灭菌20min。然后倒平板。2操作步骤2.1多管发酵（大肠菌群的测定）2.1.1水样的采集用高温灭菌过的试剂瓶到九龙江取水，将瓶子连瓶盖一起伸到10-15厘米的深处打开瓶塞，等水满后盖上盖子后从水中取出。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又流回瓶中，从而增加污染。2.1.2水样的稀释将灭菌的三根试管各装4.5mL的

5、无菌水标上1、2、3的记号。充分振荡水样，从中吸取0.5mL于1号试管中，充分振荡即得1：10的稀释液。同理配制1：100及1：1000稀释液。2.1.3初步发酵试验在1个含有50ml三倍浓缩的乳糖胆盐蛋白胨发酵烧瓶中，加入100ml水样（轻度污染水的测定）。在2支含有5ml三倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，各加入10ml水样（中、轻度污染水的测定各一支）。从原水样、1:10、1:100、的稀释液各吸取0.5mL于4支经过灭菌的装有5mL普通浓度乳糖蛋白胨中。（每吸取一次，吸头都要换一次。）原水样，1:10重复一次（中、轻度污染水的测定各一支）。

6、将上述溶液混匀后，于36摄氏度培养24h，24h未产气的继续培养至48h。记录其稀释液的产气管数，进行复发酵试验。2.2平板分离经24h培养后，将产酸产气及48h产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24h，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。2.3复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24h，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。证实

7、有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表，即得大肠菌群数。3革兰氏染色3.1实验器材3.1.1菌种大肠杆菌24h~48h营养琼脂斜面培养物3.1.2染色剂革兰氏染色液3.1.3仪器及其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸、生理盐水等3.2操作步骤3.2.1制片（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中间加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，制成很薄的涂面，注意取菌不要太多。（2）晾干：让涂片在酒精灯火焰上方文火烘干。（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）3.2.

8、2初染（1）结晶紫色染色：将玻片置于干净的培养皿上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1-2分钟。（2）水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。3.