总大肠菌群的测定实验报告1

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1、陕西科技大学环境工程微生物综合实验报告课题名称：水样微生物学指标的测定学院：资源与环境学院班级：姓名：2011年总大肠菌群的测定实验报告摘要:本实验综合应用了微生物基本原理和基本实验技术，以生活用水为实验对象，测定其大肠菌群。在没有老师的指导下，独立完成培养基的制备及灭菌操作。对不同类型的微生物进行分离、纯化、观察、描述。我们检测出来的细菌的MPN值为645，结果不纯净。关键词总大肠菌群测定发酵培养平板标记细菌菌落总数前言在给水净化工程中，水源水先经过处理后才能供给用户。饮用水要求清澈，无色，无臭，无病原

2、菌。因此，自来水在出厂前要做水质的物理化学分析和细菌卫生学检验。此试验结合给水净化工程中的细菌学检验，做总大肠菌群的检验。为了解总大肠菌群的数量指标在环境领域的重要性及大肠菌群的生化特性，特做此实验。实验目的与要求：使学生综合应用微生物学基本原理和基本实验技术，独立完成培养基的配置与美军操作及不同类型微生物的分离、纯化、观察、描述，可初步进行鉴定、分类（此步不作要求）。可以为污水、垃圾等微生物处理进行相关的实验研究。实验内容：1、自来水，河、池、湖水、纯净水中微生物的检测：【基本内容】学习水样的采取方法，

3、采用平板菌落计数技术测定水中细菌总数；采用多管发酵法（MPN）测定水中大肠菌群。说明多管发酵法检测水中大肠杆菌的原理和操作过程。记录并报告实验结果结果分析与讨论，经检查，水样是否合乎饮用标准？【基本要求】掌握水中细菌总数测定方法；掌握多管发酵法（MPN）测定水中大肠菌群的方法；了解大肠杆菌数量与水质状态的关系；了解大肠杆菌的数量在饮用水中的重要作用；掌握污水细菌总数测定方法。一．所选的微生物类群：总大肠菌群和细菌菌落总数二．培养及名称和组成：1.乳糖蛋白胨培养基配方：蛋白胨10g、胆盐3g、乳糖5g、氯化

4、钠5g、质量浓度16g/L溴甲酚紫乙醇溶液1mL、蒸馏水1000mL、PH为7.2~7.42.三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制3.伊红-亚甲蓝培养基配方：蛋白胨10g、乳糖10g、磷酸氢二钾2g、琼脂20~30g、蒸馏水1000mL、质量浓度20g/L的伊红水溶液20mL、质量浓度5g/L亚甲蓝水溶液13mL4.肉汤蛋白胨培养基牛肉膏3g、蛋白胨10g、蒸馏水1000mL、氯化钠5g，PH：7.0~7.2三．环境样品名称：科大湖水环境样品来源：科大湖早晨九点在湖边处，取距水面10

5、-15cm的深层水样，先将灭菌的具塞三角瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，共取湖水400ML。四．培养基配置和灭菌步骤（一）配培养基1.乳糖蛋白胨培养基（供多管发酵法的复发酵用）（1）配方：蛋白胨10g，牛肉膏5g，乳糖5g，氯化钠5g，质量浓度16g/L溴甲酚紫乙醇溶液1mL，蒸馏水1000mL，pH为7.2-7.4。（2）制备：按配方分别称取蛋白胨，牛肉膏，乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水，调整pH为7.2-7.4。加入质量浓度16

6、g/L的溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀后分装于试管内。塞好棉塞，包装后灭菌，115℃（相对蒸汽压力0.072MPa）灭菌20min，取出后置于阴冷处备用。-2.三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基（供多管发酵法的初发酵用）按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制，分装于试管中每管5mL；分装与大试管中，每管50mL，然后在每管内倒放装满培养基的小倒管。塞好棉塞、包装后灭菌，灭菌条件同上。3.伊红-亚甲蓝培养基（1）配方：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂20-30g，蒸馏水1000mL，质量浓度20g/L的伊

7、红水溶液20mL，质量浓度5g/L亚甲蓝水溶液13mL（2）制备：先将琼脂加入900mL蒸馏水中加热溶解，然后加入伊红水溶液，亚甲蓝水溶液和蛋白胨，混匀使之溶解，加蒸馏水补足至1000mL，调整pH为7.2-7.4，趁热用绒布过滤，再加乳糖，混匀后定量分装于锥形瓶内，包装后灭菌。灭菌条件：0.072MPa（115℃，15-20min）（二）灭菌的步骤1.包装（1）移液管的包装：将移液管的尖端，放在4-5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包住移液管尖端，用左手将移液管压紧，在桌面上

8、向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下的纸折叠打结。多支包装，待灭菌。（2）培养皿的包装：培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸将10套培养皿（皿底朝里，皿盖朝外，5套、5套相对而放）包好。（3）棉塞的制作：按试管口或锥形瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中间厚、周围逐渐变薄的近正方形，折一个角后（成五角形）卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过紧或过松用手提棉塞，以管、瓶不掉下为宜。棉塞四周应紧贴管壁或瓶壁