银杏内酯b抗小鼠胚胎着床作用的免疫组织化学观察

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1、银杏内酯B抗小鼠胚胎着床作用的免疫组织化学观察崔风云1.2刁英1（通信作者）（1遵义医学院附属医院生殖中心贵州遵义563003）（2河南省汝州市第一人民医院河南汝州467500）【摘要】通过从免疫组织化学角度对银杏内酯B（GB）抗小鼠胚胎着床作用进行观察，得出结论：GB通过干扰FN、LN在小鼠子宫内膜上的表达，影响了蛻膜反应，这可能是该药抗着床作用的重要机制之一。【关键词】银杏内酯B;小鼠胚胎；免疫组织化学【中图分类号】R392【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）20-0185-

2、02银杏内酯BGB）是从银杏叶中提取出来的萜类化合物，属于PAF天然桔抗剂的一种，活性最强，特异性最高，具有专属的抗PAF活性。近年来许多研究表明：细胞外基质（ECM）的主要成分纤粘连蛋白（FN）和层粘连蛋白（LN）在胚泡植入过程中起重要作用［1］。木研宄拟通过免疫组织化学法，研究GB在小鼠胚泡植入时，对FN、LN在小鼠子宫内膜上表达的影响，以探讨其抗着床作用的机理。1.材料和方法1.1实验动物处理将体重25〜30g的未经产成年雌性昆明小鼠，按雌雄2:1合笼交配；发现阴栓者定为妊娠第0天（D0天）。将

3、25只孕鼠平均分为5组，均于D2天，于右侧子宫角的宫腔内注射不同剂量的GB10μl、20μl、30μl、40μl、50μl作为实验侧，左侧子宫角的宫腔内注射相应剂量的生理盐水作为对照侧。另取3只孕鼠，未进行任何处理，作为空白对照组。1.2标木制备将实验小鼠于D8天用脱颈椎法处死后，立即剖腹肉眼观察子宫，记录胚胎数目，并取出双侧子宫角，用以免疫组化及HE染色。1.3免疫组织化学染色采用免疫组织化学Envision法染色。1.4结果判定阳性结果必须具备：细胞结构清晰，阳性颗粒

4、定位、定性好，着色明显高于背景。1.统汁学方法采用SPSS19.0统计学软件对数据进行分析，计量资料用均数&plUSmn;标准差表示，进行t检验、单因素方差分析及均数趋势检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2.结果2.1一般组织学以及肉眼观察3.1.1肉眼观察对照侧小鼠D8天，出现子宫变粗，颜色淡红现象，胚泡发育相同II均匀分布于子宫内壁，成串珠状，数量少于空白对照组，但无统计学差异(P〉0.05)。而实验侧小鼠妊娠子宫有粗有细，直径不相冋，并且胚胎数量变少，胚胎变性坏死后子宫有瘀血，并伴有水肿,

5、胚胎总数明显少于对照侧，且随GB剂量增大，小鼠胚胎数量明显减少。3.1.2—般组织学观察光镜下D8天：对照侧小鼠子宫内膜有明显的蜕膜反应，绒毛结构较发达，胎盘发育尚不完善，有少量的血细胞分布于绒毛间隙，蜕膜与绒毛膜之间可见较多星形巨细胞分布。实验侧小鼠胚胎发育不良，蜕膜较对照组薄，蜕膜细胞间隙见有大量红细胞，绒毛间隙见白细胞浸润，巨细胞结构松散；部分蜕膜细胞发生变性和坏死。大剂量GB(≥40μl)时出现无胚胎着床。3.2免疫组织化学观察3.2.1FN在小鼠子宫内膜上的表达及平均光密度值对照

6、侧FN存在于小鼠子宫内膜的上皮基膜、子宫腺基膜、绒毛滋养细胞和蜕膜细胞周围的基质中；此期绒毛发达，结构松散。实验侧随着GB剂量的增大，FN免疫阳性物表达逐渐减少，≥40μl吋几乎无阳性表达。空白对照组FN在小鼠子宫内膜上免疫阳性物的平均光密度值为0.30±0.02,与对照侧比较，差异无统计学意义(P>0.05)。3.2.1LN在小鼠子宫内膜上的表达及平均光密度值对照侧LN存在于小鼠子宫内膜的子宫腺基膜、绒毛滋养细胞、上皮基膜和蜕膜细胞周围的基质中；此吋期的绒毛发达，结构呈现出

7、松散状。随着GB剂量的不断增多，实验侧LN免疫阳性表达物则出现了逐渐减少现象，≥40μl的时候则几乎无阳性表达。空闩对照组LN在小鼠子宫内膜上表达的平均光密度值为0.31±0.01，与对照侧比较，差异无统计学意义(P>0.05)o1.讨论GB是从银杏叶中提取出来的萜类化合物，属于PAF天然拮抗剂的一种，具冇专属的抗PAF活性［1］。研究报道，PAF的特异性桔抗剂海风藤酮，通过桔抗PAF有明显的抗胚胎着床作用［2】。联系母体蜕膜细胞与子体滋养细胞的介质是细胞外基质(ECM),它

8、是一种含有多种化学成分介质，其最主要的成份是LN和FN。研究表明，LN和FN与胚泡的植入有着非常密切的联系，它们在子宫内膜上皮的基底层、胚泡期胚胎的细胞表面广泛分布，无论是在维持成体结构、功能完善的生理活动中，还是在胚胎着床以及发育过程中，都具有至关重要的作用；据研究发现，蜕膜的形成过程中，其四周渐渐聚集着LN和FN等物质，这些物质将通过细胞膜上相应的受体把细胞粘附到基质当中，使细胞的定向迁移就会沿着其浓度和梯度，并且在迁移的过程中分裂增殖LN和FN。L