血清学鉴定实验

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1、血清学实验《临床微生物学检验》实验医学检验技术教研室血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中的特异性抗体）血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学反应，以确定病原菌的种或型。（用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原）微生物抗原成分-----细菌抗原成分菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原---脂多糖蛋白质的复合物鞭毛抗原称为H抗原表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆菌的表面抗原称为封套抗原或K

2、抗原,肺炎双球菌的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi抗原细菌抗原细菌的各种抗原抗原抗体反应抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内（invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作

3、试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。抗原抗体反应条件抗原抗体3.环境因素：（1）电介质：0.85%NaCI；（2）温度：37或56（3）pH值：7.0（4）振荡：适当的机械振（5）反应时间抗原抗体反应的特点特异性和交叉性若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高。反应的可逆性抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重

4、新解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。抗原抗体反应特点最适比和带现象只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的结合反应。当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这一现象称为带现象。抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过多出现的抑制现象称后带现象。为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗原或抗体作适当稀释。抗原抗体反应特点反应的二阶段性结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟。反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间。凝集反应颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳胶、白陶土

5、、离子交换树脂和红细胞的抗原与其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝聚成肉眼可见的凝集小块。凝集原——凝集素直接凝集反应玻片法试管法抗原抗体反应类型-----凝集反应血清学鉴定掌握细菌的血清学鉴定法。实验目的实验原理根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。实验材料1.菌种待检细菌2.试剂多价沙门菌O(A-F)诊断血清3.其他载玻片沙门氏菌诊断血清（11种）O2O4O7O9HaHbHcHdHiViA-F群多价OA-F群多价OO抗原、H抗原和Vi抗原O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的耐热多糖抗原，100℃，

6、2.5h不被破坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多糖侧链多糖的组成。H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共有63种，60℃加热30～60min及酒精作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲醛。Vi抗原:是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸聚合物，60℃加热1h即破坏其凝集性和免疫原性。沙门氏菌的主要抗原组成O抗原：至少58种,含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反应。沙门氏菌菌型的表示方法血清型以数字和字

7、母表示.例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表.鼠伤寒沙门氏菌:O抗（1，4，[5]，12），第Ⅰ相H抗原（i）第Ⅱ相H抗原(1,2)。它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（1，4，[5]，12：i：1，2）[]内的O抗原可能存在或不存在。[]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。沙门氏菌的血清鉴定的方法用O、H和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝聚试验。1.先用O因子血清确定菌株所属的O群及O抗原的各种成分。2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原以确定血清型。3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。1.先用A~F多价O血

8、清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。2.再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。3.确定O群之后，分别用