中药血清学实验方法

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1、中药血清药理学实验方法的若干问题http://www.100md.com-编者按：“中药血清药理学”是研究中药(复方)药效(理)作用的一种实验方法，而不是一门学科。如何界定“中药血清药理学”的内涵以及确定其应用领域和范围；如何使实验研究结果可重复，实验技术可推广应用，尚需要作大量探索性研究，包括研究的基本方法和技术。为此，本刊开辟“中药血清药理学研究”栏目，欢迎读者来稿，共同探讨，以规范技术，完善方法，进一步推动中药药效(理)学的研究。李仪奎摘要：中药血清药理实验方法是一种新的体外实验方法，对于中药粗制剂的体

2、外实验尤具重要价值，但如实验处理不当，在许多重要环节上有使实验结果出现假阳性或假阴性的可能，本文对此从方法学方面作了简要的论述。主题词：@血清药理学/方法分类号：R285.5文献标识码：A离体实验方法对于药理学研究十分重要，特别是在细胞、亚细胞水平上进行深入的机理研究，没有细致的体外分析是难以实现的。在新药研究领域内，国外目前也日益重视体外实验，包括在细胞模型上的观察。一是由于所需样品量较少，实验效率高。另一方面则是由于道德上的原因，减少动物的痛苦和牺牲。但是离体实验方法对于中药复方而言，一直是一个难题。中药

3、粗制品含有大量杂质，如直接加入离体反应系统，其渗透压、pH、鞣质、无机盐离子等许多非特异性理化因素，将严重干扰实验，导致假阳性或假阴性的结果，因而其科学性较差，难以得到认可。近年来开展的中药血清药理实验方法是一种新的体外实验方法，它将受试药物经口给予动物后，取其血清作为药物源加入离体反应系统中研究其药理作用，关于这种方法的由来及其可行性、可靠性分析，作者已有另文报道[1]。目前该方法已在中药药理研究中广泛应用，研究范围涉及抗菌、抗病毒、心血管、呼吸、免疫、消化等许多方面，取得了可喜的成绩。但这一方法问世至今仅

4、有10余年历史，作为一种成熟的方法学还需要积累经验，在许多重要环节上如处理不当可能使实验出现假阳性或假阴性结果。1关于给药剂量血清药理实验方法首先要给动物服药，然后取其血清作为药物源进行药理学观察。给药的剂量应如何掌握?这里必须要注意一个问题，即含药血清加入体外反应系统后，浓度将被稀释。例如以等效剂量给予实验动物，取其血清以1/10的体积加入反应系统(例如100μL培养液中含有10μL含药血清)，则血药浓度被稀释了10倍。在这种情况下，如果反应系统出现阴性反应，它并不能排除由于药物浓度过低而出现的假阴性结果。

5、所以，如何使体外反应系统中具有与在体条件下可比拟的药浓度，是血清药理实验方法中第一个需要考虑的问题。我们提出以下两种方法供参考。1.1增大给药剂量参考公式，即给药剂量=在体试验的给药剂量×反应系统中被稀释的倍数。这一方法可以部分地弥补含药血清在体外反应系统中的被稀释，但存在以下两个问题：(1)血药浓度并不能与给药剂量呈等倍数的提高，给药剂量加倍，血药浓度不可能加倍。(2)给药剂量可以提高的倍数受到药物体积的限制，特别是中药复方体内给药剂量常较大，由于受到灌胃药物浓度和体积的限制，不可能达到公式所要求的量。1.

6、2血清冻干粉法按新药药理研究的技术要求设计剂量给药，将含药血清制成冷冻干燥粉(冻干粉)，以冻干粉加入反应系统，使之达到需要的浓度。2血清冻干粉和等浓概念所谓“血清冻干粉”，即在制备得含药血清后，首先在冰箱中冻成固体冰块，然后在-70℃条件下，真空干燥蒸干水分，形成干燥粉末。采用这种方法可以根据需要控制反应系统中的药物浓度。这里有必要提出一个概念，即“等浓”概念。所谓等浓，是指在体外反应系统中的药物浓度同体内血药浓度相等。在这种条件下，其所得结果最有可比性，最能说明药物的体内作用，这对于评价新药的药效更具重要性

7、。采用血清冻干粉法可以达到等浓的要求，而用前一种方法则不能。例如以相当于100μL的含药血清冻干粉加入100μL培养液中，则培养基内的药浓度理论上保持未被稀释，即等浓。反之，如果将含药血清直接加入体外反应系统，则无论如何不可能达到等浓要求，除非将反应物(细胞或组织)直接置入血清中而无任何营养液存在。而在实际操作中，一般都能发现，含药血清的加入量都有一定的限度，超过这一限度，将对细胞或组织活动产生不利影响。我们采用血清冻干粉法观察等浓条件下的中药作用，例如小青龙汤含药血清对致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒和组胺释放的

8、影响等，都得到较为满意的结果。血清冻干粉不仅可根据需要提高体外反应系统中的含药浓度或形成等浓，而且有利于血清的贮藏保存。3关于采血时间动物给药后，应在什么时间采血制备含药血清?理想的采血时间应落在血药浓度的高峰期。如何达到这一目的，目前尚没有一个成熟的方法可供参考。因动物给药后，不仅不同药物达峰时间不同，且同一药物的不同指标，有其不同的最佳采血时间。在这个问题上，不能期望通过若干中药或其复方的实验结