免疫血清学实验课件

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1、双向免疫扩散试验直接凝集试验抗原（antigen,Ag）:能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质。抗体(antibody,Ab)：B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性结合抗原的一组糖蛋白。抗原-抗体反应的基本检测方法凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。补体参与的反应免疫标记技术（immunolabellingtechnique）:用示踪物质标记抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。一、沉淀反应-双向免疫扩散试验原理用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶

2、性抗原、抗体在其中能自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。主要材料器材：载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、注射器针头试剂：生理盐水、琼脂粉、抗原（正常小鼠IgG）、抗体（兔抗小鼠IgG血清）配制1%琼脂：用生理盐水配制，加热溶解制板：趁热将3.5ml融化琼脂水平铺在玻片上，室温下冷却凝固打孔：用打孔器按图示打孔稀释抗体：取5支EP管，将抗体倍比稀释加样：周围孔加入不同稀释度的抗体，中间孔加入抗原琼脂板放入湿盒内，置4℃，24-48小时后观察结果。实验步骤Ag12345

3、control6倍比稀释法1:41:81:161:64100µL100µL100µL100µL100µL100µL100µL样品管第一管第二管第四管结果判断123456应用测定抗体的效价用特异性抗体检测抗原检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度，比较抗原之间的异同点两个样品为同一抗原存在三种不同的抗原两个样品部分相同二、凝集反应原理颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集团块。基本类型直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。直接凝集实验（ABO血型鉴定）器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、灭菌枪头、

4、玻片、一次性采血针试剂抗A试剂（蓝色）、抗B试剂（黄色）主要材料实验步骤干净玻片上分别滴加抗A、抗B试剂各一滴酒精棉球消毒无名指，采血针采血用加样器加末梢血各1滴不断转动玻片，使血液与试剂充分混匀，静止1-2min左右，观察结果AB抗A抗B结果判断血型抗A试剂抗B试剂A+-B-+0--AB++注意事项注意无菌操作滴加血液时，不要使枪头尖触及试剂