免疫学课件免疫血清学技术

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1、第13章免疫学技术概论重点免疫学技术类型影响免疫血清学反应的因素第1节免疫血清学技术概述免疫血清学技术类型：凝集试验、沉淀试验、标记抗体技术（免疫荧光抗体技术、免疫酶标记技术、放射免疫测定）、中和试验等血清学反应的一般特点特异性和交叉性抗原与抗体结合机理血清学反应的影响因素：电解质、温度、酸碱度带现象：前带后带第2节细胞免疫检测技术检测机体血液中的T细胞数量E玫瑰花环试验T细胞酸性α醋酸萘酯酶测定检测机体血液中T细胞转化功能淋巴细胞转化试验巨噬细胞移动抑制试验T细胞活化试验第3节血清学技术的应用及发展趋势疫病诊断动植物生理活性物质研究物种及微生物鉴定动植物形状的免疫标

2、记生物制品研究致病机理研究分子生物学研究发展趋势第14章凝聚性试验第1节凝集试验直接凝集试验：颗粒性抗原间接凝集试验：间接血凝实验、乳胶凝集试验、炭素凝集试验直接凝集试验：颗粒性抗原基本原理：电解质颗粒性抗原+相应抗血清抗原颗粒凝集(细菌、红细胞)比例适合凝集原凝集素过多前带现象（稀释血清）方法：玻片法、试管法、微量法间接凝集试验：基本原理可溶性抗原（或抗体）+惰性载体（聚苯乙烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等）抗原（或抗体）致敏载体抗原（抗体）致敏载体+相应抗体（或抗原）被动载体凝集（间接乳胶凝集、间接炭素凝集、间接红细胞凝集等）第2节沉淀实验电解质可溶性抗原+免疫血清

3、出现沉淀现象(血清蛋白、病毒)（抗体）比例适合沉淀原沉淀素比例不适合不出现沉淀现象容易过多后带现象（稀释）环状沉淀试验双向单扩散（辐射扩散）双向双扩散免疫电泳对流免疫电泳火箭免疫电泳环状沉淀试验原理：小试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在界面应，形成白色沉淀环。用途：检测皮毛中的炭疽杆菌抗原（Ascoli试验）免疫荧光抗体技术原理：异硫氰酸荧光素（FITC）原理：荧光素（F）+AbAbF(FITC)AbF+AgAg-AbF紫外光Ag-AbF标记抗体的制备：抗原免疫动物抗体提取IgG标记标记抗体的提纯标记抗体的鉴定荧光抗体染色：标本制备染色（直接法、间接发）应

4、用：用AbF检测抗原（定性、定位）特点：敏感，需荧光显微镜免疫酶标记技术原理：常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP）酶标抗体的制备：抗原免疫动物抗体提取IgG标记（戊二醛法、过碘酸钠法）标记抗体的提纯标记抗体的鉴定常用免疫酶技术：免疫酶组织化学染色技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）应用：放射免疫分析原理：竞争性RIA固相夹心RIAAg*(F)+AbAg*-Ab(B)+AgAg-Ab标记用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫测定、固相非竞争放射免疫测定应用：用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等

5、测定中和试验（病毒、毒素中和试验）原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感动物、鸡或鸭胚、细胞活性例1-NDV9～11d鸡胚24～48h鸡胚死亡-NDV+抗血清9～11d鸡胚鸡胚不死亡例2口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡例3FMDV仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细胞细胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、脱落、裂解FMDV+抗血清IB-RS-2单层细胞细胞无病变CPU用途：1.用已知血清鉴定病毒——诊断病毒病2.用已知病毒检测血清抗体——诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价）免疫检测新技术SPA免疫

6、检测技术免疫胶体金检测技术：免疫胶体金光镜染色法、免疫胶体金电镜染色法、胶体金免疫层析法等免疫转印技术免疫核酸探针技术细胞免疫技术一．E玫瑰花环试验原理：人、猪、牛、羊等的T细胞膜上的CD2是绵羊红细胞受体，马、猪的T细胞膜上的CD2是豚鼠红细胞的受体。E花环二.酸性α醋酸萘酯酶测定原理：酸性α醋酸萘酯酶醋酸萘酯α萘酚+醋酸离子+六偶氮副品红红色反应物+甲基绿红黑色颗粒用途：1.鉴别T、B细胞；2.血液中T细胞计数三．淋巴细胞转化试验（一）形态学试验法原理：PHA+T细胞（有PHA受体）转化大的淋巴母细胞显微镜观察计算转化率转化率=(过渡型细胞+母细胞)/200个淋巴

7、细胞×100%特点：简便，准确性较差（二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）掺入法原理：试验管对照管PHA+T细胞+3H-TdRPHA+T细胞转化转化淋巴母细胞淋巴母细胞（掺入3H-TdR）（无3H-TdR掺入）液体闪烁仪测掺入测CPM3H-T的脉冲数CPM计算转化刺激指数SI=试验管CPM/对照管CPM特点：准确，需昂贵的闪烁仪四、T细胞亚群测定技术流式细胞仪术免疫荧光技术五、细胞因子检测技术