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1、生化反应与血清学实验《医学微生物学》实验七一、生化反应掌握细菌生化反应的原理和临床意义。熟悉鉴别细菌常用的生化试验原理、方法和结果判断。[实验目的]生化反应基本原理不同的细菌含有不同的分解代谢的酶具有不同的分解代谢途径对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同利用生化方法检测代谢产物以判断细菌的分解代谢特征，从而达到鉴定细菌的目的。称：细菌的生化反应检测法知识点常见的生化反应对糖的发酵甲基红试验单糖发酵试验VP试验对蛋白质的分解吲哚试验硫化氢试验枸橼酸盐利用试验尿素酶试验其他试验实验材料1.菌种大肠埃希菌、沙门氏菌2
2、.微量生化反应管葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。3.试剂吲哚试剂葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖1.糖发酵试验HCOOH脱氢酶CO2+H21.糖发酵试验（1）原理细菌产生的酶酸糖（酸碱指示剂）气体溴甲酚紫1.糖发酵试验（2）方法37℃培养18～24h5种糖生化反应管大肠埃希菌、沙门氏菌接种针穿刺接种观察结果中性或碱性→紫色酸性→黄色1.糖发酵试验（3）结果判断溴甲酚紫＋－＋有细菌生长培养基呈混浊，可能出现3种结果。（3）结
3、果判断2.靛基质（吲哚）试验色氨酸酶吲哚（无色）色氨酸吲哚试剂玫瑰吲哚（红色）（1）原理（2）结果判断阳性2.靛基质（吲哚）试验3.硫化氢试验酶硫化氢含硫氨基酸硫化铁黑褐色或硫化铅（1）原理（2）结果判断3.硫化氢试验生化反应材料分配分组两人/组菌种沙门氏菌、大肠杆菌各一支生化反应管七支/人二、血清学鉴定掌握细菌的血清学鉴定法。[实验目的]实验原理根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。二、血清学鉴定实验材料1.菌种待检细菌2.试剂多价沙门菌O(A-F)诊断血清3.其他载玻片沙门氏菌
4、的主要抗原组成O抗原：至少58种,含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反应。沙门氏菌诊断血清（11种）O2O4O7O9HaHbHcHdHiViA-F群多价OA-F群多价O先用A－F和Vi血清检测，根据结果再进行其他鉴定。注意：实验方法50ul血清+待检菌50ulNS+待检菌结果判断均匀混浊颗粒状凝集物＋－群别菌型抗原oHA甲型副伤寒沙门菌1,2,12a:-B乙型副
5、伤寒沙门菌德比沙门菌鼠伤寒沙门菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌6,7,(Vi)c:1,5D伤寒沙门氏菌9,12,Vid:-E鸭沙门氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙门氏菌11i:1,2沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表注意事项1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。2.沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊断血清发生凝集。血清学实验进程先鉴定A－F和Vi，根据结果
6、再进行其他鉴定。A－FVi实验进程--为非沙门氏菌属，不再继续鉴定其他抗原成分。+-初步判断为沙门氏菌属，继续鉴定其他抗原成分。-+初步判断为沙门氏菌属，但需去除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他抗原成分。血清学实验材料分配分组4人/组菌种待测菌种一支诊断血清1盒/组群别菌型抗原oHA甲型副伤寒沙门菌1,2,12a:-B乙型副伤寒沙门菌德比沙门菌鼠伤寒沙门菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌6,7,(Vi)c:1,5D伤寒沙门氏菌9,12,Vid:-E
7、鸭沙门氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙门氏菌11i:1,2沙门氏菌属常见菌型诊断抗原表
