大白栓菌的人工培养条件优化

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1、大白栓菌的人工培养条件优化作者：谭梦华段朝红桂裕成向江涛叶建武张亚雄汪鋆植【摘要】　　目的探讨大白栓菌的人工大规模培养条件。方法采用正交实验设计筛选大白栓菌的固体及液体培养条件。结果固体培养基的最佳配方为栗木屑含量70g，玉米粉含量35g，石膏含量2g，白糖含量1g；大白栓菌液体培养的最佳条件是玉米粉4.2g/100ml,栗木汁5.0g/100ml,溶氧条件为静置培养。结论大白栓菌可以采用人工大规模培养,为进一步开发利用创造了条件。【关键词】大白栓菌人工培养配方　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheartificialrearingconditionofTr

2、ameteslactinea(Berk.)Pat.MethodTheorthogonaldesignulaofthesolidculturemediumulaoftheliquidculturemediumhavebeenascertainedtobecornflour4.2g/100ml,castaneasppjuice5g/100ml,dissolveforoxygenconditionstaticculture,notbEingputintorockingbed.ConclusionTheartificialrearingconditionisapplicabletothelarge-

3、scalecultureofTrameteslactinea(Berk.)Pat,econditionsforfurtherdevelopment.　　Keyeteslactinea(Berk.)Pat.；Artificialrearing；Formula　　大白栓菌Trameteslactinea(Berk.)Pat.为多孔菌科真菌，担子果一年生，无柄，木栓质。它生于活叶树木材上，分布于中国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、巴基斯坦、印度、斯里兰卡、澳大利亚等国家［1］。　　大白栓菌作为天麻等兰科植物种子萌发菌，具有一定的经济价值［2］。但大白栓菌野生资源较少，不能满足其开发利用的需要。因此

4、本实验对大白栓菌的人工培养进行了研究。　　1材料与仪器　　1.1材料　　玉米粉、石膏、白糖、栗木屑、琼脂、95%酒精(天津科密欧化学试剂厂20050801)、无水乙醇(武汉中南化工试剂有限公司20050906)、氯仿（上海宏申化工厂20051116）、醋酸乙酯（天津市东丽区天大化学试剂厂20050608）、薄层板及硅胶（青岛海洋化工有限公司20050911）、柱层析硅胶200-300目（青岛海洋化工厂分厂20050311）。大白栓菌由湖北三峡科技学校提供，经王绍柏老师鉴定为大白栓菌（Trameteslactinea(Berk.)Pat.）。　　1.2仪器　　旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂RE

5、-52AA）、恒温振荡器（国华企业CHA-S）、生化培养箱(广东省医疗器械厂LRH-280)、Centrifuge5810R冷冻离心机、DZF-6020型真空干燥箱等。　　2方法与结果　　2.1菌种的纯化(涂布分离法)［3］　　2.1.1培养基配制先将栗木屑用水加热提取得栗木汁，将玉米粉、石膏、白糖以一定比例混匀，然后加入栗木汁，再加入2%琼脂,用玻棒搅拌均匀后加热至沸,0.1～0.15MPa蒸气高压灭菌30min。　　2.1.2平板的制作及接种各培养皿趁热倒入5ml培养基，冷却后即得平板，于无菌操作台上进行接种，将菌丝放到75%酒精中冲洗，然后剪碎放入装有无菌水的小三角瓶中，充分摇匀制成孢

6、子悬浮液后涂布到平板上。　　2.1.3菌体培养置28℃恒温培养箱中培养120h。培养皿中分别长出了2～4个菌落，通过电子显微镜镜检，确定了大白栓菌。　　2.2菌种的斜面保藏　　2.2.1试管斜面制备使用φ15×100玻璃试管，趁热倒入2ml培养基，包扎平放，冷却后即成斜面。　　2.2.2接种与培养将2.1培养皿中的各个菌落于无菌操作台上分别接种到试管中，28℃恒温培养72h。　　2.2.3保藏挑选上述生长良好的试管斜面菌种于冰箱中冷冻保藏。　　2.3大白栓菌的固体培养　　2.3.1培养基的确定用松木屑、玉米芯屑、杂木屑、栗木屑作为培养基进行实验，发现栗木屑的培养效果最佳。但只用栗木木屑作为培

7、养基，由于其营养成分不能很好地满足大白栓菌的生长，虽然能生长，但其生长周期长，菌丝活性较差。因此，我们对培养基配方进行了研究。确定用栗木屑，玉米粉，石膏，白糖组成培养基，并对配方进行了优化。　　2.3.2培养基的优化采用正交实验对栗木屑、玉米面、石膏、白糖配比进行优化。其因素水平见表1，以生长的大白栓菌菌丝干重为考核指标。结果见表2。表1正交实验水平表（略）表2L9(34)正交实验方案及结果（略）　　从各因素