大白栓菌的人工培养条件优化论文

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1、大白栓菌的人工培养条件优化论文谭梦华段朝红桂裕成向江涛叶建武张亚雄汪鋆植【摘要】目的探讨大白栓菌的人工大规模培养条件。方法采用正交实验设计筛选大白栓菌的固体及液体培养条件。结果固体培养基的最佳配方为栗木屑含量70g，玉米粉含量35g，石膏含量2g，白糖含量1g；大白栓菌液体培养的最佳条件是玉米粉4.2g/100ml,栗木汁5.0g/100ml,溶氧条件为静置培养。结论大白栓菌可以采用人工大规模培养,为进一步开发利用创造了条件。【关键词】大白栓菌人工培养配方Abstract:ObjectiveToinvestigatetheartificialrea

2、ringconditionofTrameteslactinea(Berk.)Pat.MethodTheorthogonaldesignulaofthesolidculturemediumulaoftheliquidculturemediumhavebeenascertainedtobecornflour4.2g/100ml,castaneasppjuice5g/100ml,dissolveforoxygenconditionstaticculture,notbeingputintorockingbed.ConclusionTheartificial

3、rearingconditionisapplicabletothelarge-scalecultureofTrameteslactinea(Berk.)Pat,econditionsforfurtherdevelopment.Keyeteslactinea(Berk.)Pat.；Artificialrearing；Formula大白栓菌Trameteslactinea(Berk.)Pat.为多孔菌科真菌，担子果一年生，无柄，木栓质。它生于活叶树木材上，分布于中国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、巴基斯坦、印度、斯里兰卡、澳大利亚等国家［1］。大白栓菌

4、作为天麻等兰科植物种子萌发菌.freeleteslactinea(Berk.)Pat.）。1.2仪器旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂RE-52AA）、恒温振荡器（国华企业CHA-S）、生化培养箱(广东省医疗器械厂LRH-280)、Centrifuge5810R冷冻离心机、DZF-6020型真空干燥箱等。2方法与结果2.1菌种的纯化(涂布分离法)［3］2.1.1培养基配制先将栗木屑用水加热提取得栗木汁，将玉米粉、石膏、白糖以一定比例混匀，然后加入栗木汁，再加入2%琼脂,用玻棒搅拌均匀后加热至沸,0.1～0.15MPa蒸气高压灭菌30min。2.1.2平

5、板的制作及接种各培养皿趁热倒入5ml培养基，冷却后即得平板，于无菌操作台上进行接种，将菌丝放到75%酒精中冲洗，然后剪碎放入装有无菌水的小三角瓶中，充分摇匀制成孢子悬浮液后涂布到平板上。2.1.3菌体培养置28℃恒温培养箱中培养120h。培养皿中分别长出了2～4个菌落，通过电子显微镜镜检，确定了大白栓菌。2.2菌种的斜面保藏2.2.1试管斜面制备使用φ15×100玻璃试管，趁热倒入2ml培养基，包扎平放，冷却后即成斜面。2.2.2接种与培养将2.1培养皿中的各个菌落于无菌操作台上分别接种到试管中，28℃恒温培养72h。2.2.3保藏挑选上述生长良好

6、的试管斜面菌种于冰箱中冷冻保藏。2.3大白栓菌的固体培养2.3.1培养基的确定用松木屑、玉米芯屑、杂木屑、栗木屑作为培养基进行实验，发现栗木屑的培养效果最佳。但只用栗木木屑作为培养基，由于其营养成分不能很好地满足大白栓菌的生长，虽然能生长，但其生长周期长，菌丝活性较差。因此，我们对培养基配方进行了研究。确定用栗木屑，玉米粉，石膏，白糖组成培养基，并对配方进行了优化。2.3.2培养基的优化采用正交实验对栗木屑、玉米面、石膏、白糖配比进行优化。其因素水平见表1，以生长的大白栓菌菌丝干重为考核指标。结果见表2。表1正交实验水平表（略）表2L9(34)正交

7、实验方案及结果（略）从各因素水平均值(K值)分析，因素A为K2＞K1＞K3，因素B为K1K2K3，因素C为K2K3K1，因素D为K3＞K2＞K1，其培养条件为A2B1C2D3，对各因素水平的显著性进行方差分析。结果见表3。表3方差分析（略）表3结果表明，各因素水平差异无显著性，结合实际情况，其优选工艺为A2B1C2D3，即栗木屑含量为70g，玉米粉含量为35g，石膏含量为2g，白糖含量为1g。2.4大白栓菌的液体培养2.4.1培养基的配制玉米粉35g，石膏2g，白糖1g，栗木汁(栗木屑70g水煮1.5h后过滤），加自来水稀释至700ml，用玻棒搅拌

8、均匀加热至沸,.freelin。2.4.2接种及摇瓶培养三角瓶装入适量培养基灭菌后，于无菌操作台上接种，28℃恒温培养10