成人社区获得性肺炎的病毒病原学与临床特征分析

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1、·中文摘要中文摘要第一部分常见呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系的建立背景：病毒的实验室检测方法有病毒分离培养、病毒核酸分子生物学检测、病毒直接检查、血清学试验检测病毒特异性抗体等。在国外发达国家的临床实验室，病毒检测技术均比较成熟，但国内病毒检测技术普及程度低，全国的大型综合医院大多没有常规进行临床呼吸道病毒检测。少数开展病毒检测的医院，病毒检测手段相对单一，较少应用病毒诊断的“金标准”—病毒分离，多数仅应用一至两种病毒学检测方法，如免疫荧光（IF）检测呼吸道分泌物中的病毒抗原、分子生物学技术检测病毒核酸或血清学试验检测病毒特异性IgM抗体等。建立多种病毒诊断方法，包括病毒分离，对呼吸道

2、病毒感染的监测和诊断具有重要的临床意义。目的：改进细胞分离培养技术，联合直接IF检测，建立常见呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系，并验证该体系的检测敏感性、检测时间和检测通量。方法：采集广东省中医院急诊科成人急性呼吸道感染（ARI）患者和深圳市儿童医院儿童ARI患者的鼻/咽拭子标本，接种到狗肾细胞（MDCK）、恒河猴肾细胞（LLC-MK2）、人鼻咽癌细胞（HEp-2）三种细胞上，同时设置阴性对照。室温3000rpm，离心60min后补加等体积的细胞维持培养液，置34℃、含5%CO2的饱和湿度培养箱中培养。每周观察细胞病变（CPE）3～4次，于标本接种后36～48h及第5～7天，各吸取50μ

3、lMDCK及LLC-MK2培养上清做血凝试验（HAT）。CPE和/或HAT阳性者，以病毒特异性单克隆荧光抗体[甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、副流感病毒1、2、3型(PIV-1、2、3)]做IF鉴定。所有标本接种后7天，对阴性细胞再做IF筛查，阴性者判为阴性，阳性者根据阳性细胞类型选择对应的病毒特异性抗体做IF鉴定。将ATCC标准病毒株，分别接种到对应宿主细胞上，3～7天后刮取细胞作涂片固定后低温保存，在IF时作为阳性对照。结果：①2009年1月至4月期间，共检测拭子标本641份，病毒阳性87份，阳性率13.6%。检出病毒8

4、8株（1份标本为FluA/B双重感染），其中Flu-A20株，Flu-B39株，PIV-12株，PIV-21株，PIV-315株，ADV8株，RSV2株。②每块96孔板可接种11份标本，每批接种4块96孔板较为合适，即接种44份标本。③标本接种后，出现阳性结果的平均时间分别为：Flu2d、ADV3d、PIV3-4d，RSV5d。-3-····广州医学院硕士学位论文结论：本次实验建立了一个稳定的呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系，敏感性好，特异性佳，每批可检测44份标本，得到阳性结果的平均时间约为2～5天，可应用于常见呼吸道病毒分离检测。关键词：呼吸道病毒；病毒分离；免疫荧光；病原体；急性呼

5、吸道感染第二部分成人社区获得性肺炎的病毒病原学及临床特征分析背景：社区获得性肺炎(CAP)是威胁人类健康的最常见感染性疾病之一。在我国，肺炎在所有死因中排第五位。然而，目前对CAP的病原学仍知之不足，大约有17%-48%的CAP患者病原学不明。20世纪以来的几次全球流行性急性呼吸道病毒感染性疾病，如20世纪的4次流感大流行、1997年最先报道于香港的人感染高致病性禽流感、2003年的严重急性呼吸综合征（SARS）等均严重威胁着人类的健康。2009年爆发的全球甲型H1N1流感大流行，截止至2010年3月7日，已导致全球死亡16,713例，其中中国有796例，而未来的流行趋势尚不明朗。我国华

6、南地区因特殊的地理位置、海洋季风气候和农业生产方式，被国际学术界普遍认为是“世界流感中心”。2003年的SARS亦被认为起源于广东。而广州市是我国华南地区的中心大城市，与国际及内地其他城市接触交流频繁。近年来流行病学调查显示病毒性肺炎的发病率高达56%，病毒已被公认为是CAP的重要病原学之一，但是CAP诊治指南并没有提供详细的有关病毒性肺炎的评估和治疗建议。国内目前尚缺乏成人病毒性CAP病原及临床特征的详细资料。目的：检测成人CAP的病毒病原学，分析临床特征。方法：收集2009年4月至2009年12月期间，就诊于广州医学院第一附属医院的CAP患者的鼻/咽拭子、急性期与恢复期（2-4周后）

7、血清，记录病史资料。应用常见呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测鼻/咽拭子标本，应用血凝抑制试验（HI）、间接IF试验检测急性期与恢复期血清中呼吸道病毒特异性IgG抗体滴度（4倍或以上升高为阳性）。呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定、RT-PCR或血清学试验任一项阳性则判断为病毒感染。结果：①最终入选CAP病例149例，男性84例，女性65例，年龄中位数M（四分卫间距IQR）为60(35～77)岁，鼻