龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶与其致病机理的分析

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1、福建农林大学硕士论文龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶及其致病机理的研究摘要拟茎点霉[PhomopsislonganaeChi.]是龙眼果实潜伏侵染的主要真菌性病害之一。拟茎点霉在采后龙眼果实的致病过程中，会产生细胞壁降解酶（胞壁降解酶cell-walldegradingenzymes，CWDEs），而细胞壁降解酶是引起植物致病的重要因子。本文以龙眼果肉上分离出的拟茎点霉为实验对象，从产酶条件、致病作用及酚类物质对产细胞壁降解酶活性的影响等三个方面着手，研究龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶的致病机理。试验结果如下：1、采用

2、改良的Czaper培养液培养拟茎点霉，所得的滤液经离心，留上清液即粗酶液。粗酶液中可以检测出Cx、β-葡萄糖苷酶、PG和PMG四种主要细胞壁降解酶。分别从碳源、氮源、培养时间、培养基初始pH值、温度等方面研究该病菌的产酶条件，再以培养时间、培养基最适起始pH、碳源浓度、氮源浓度为四个实验因素，按正交表L16(45)设计正交试验，得出拟茎点霉病菌产细胞壁降解酶的最佳条件：培养时间为4d；培养初始pH值为5.0；碳源为1.5%的龙眼壳粉；氮源为0.5%的硝酸钾。在此培养条件下，β-葡萄糖苷酶和PG活性最高，β

3、-葡萄糖苷酶活性可达到1533.150U/mL；PG可达到282.310U/mL，分别是优化前的4.5倍和1.5倍。2、拟茎点霉细胞壁降解酶对龙眼果皮细胞膜具有明显的破坏作用。龙眼果实经果胶酶、纤维素酶及果胶酶、纤维素酶混合酶处理后，龙眼果皮细胞膜透性增加，损伤影响以混合酶处理的最严重，损伤率高达48.37%，而纤维素酶和果胶酶损伤率分别为40.43%和34.78%。拟茎点霉胞壁降解酶对龙眼果皮组织具有显著的破坏作用，出现褐色、水渍状病斑，其中以果胶酶、纤维素酶混合酶处理的破坏程度最大，果胶酶次之，纤维素

4、酶最小。拟茎点霉病菌侵染龙眼果实后，在不同感病部位的果皮多聚半乳糖醛酸酶活性最强，但不同感病部位的果皮纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶和果胶甲基半乳糖醛酸酶的活性表现不同，其中在果皮的病健交界处最高，病斑处其次，健康处最低。3、较低浓度的邻苯二酚(0.2~0.5mg/L)、间苯三酚(0.2~2mg/L)和香草醛(0.2~2mg/L)对龙眼拟茎点霉病菌产细胞壁降解酶都有一定的诱导作用。1mg/L浓度的邻苯二酚、2mg/L浓度的间苯三酚和5mg/L浓度的香草醛都能降低龙眼拟茎点霉病菌产纤维素酶、β-

5、葡萄糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶和果胶甲基半乳糖I福建农林大学硕士论文龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶及其致病机理的研究醛酸酶等细胞壁降解酶的产量，而且随着酚类物质的浓度的升高，其产量逐渐下降。当三种酚类物质浓度为10mg/L时，都能抑制龙眼拟茎霉病菌产细胞壁降解酶。邻苯二酚、间苯三酚和香草醛都能抑制龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶的活性。其中，香草醛的抑制作用最强，10mM的香草醛能完全抑制Cx、β-葡萄糖苷酶、PG和PMG的活性；而邻苯二酚、间苯三酚只有在浓度分别为200mM和500mM时才能完全抑制这四种酶的活性。关键

6、词：龙眼；拟茎点霉；细胞壁降解酶；产酶条件；酚类物质；致病作用II福建农林大学硕士论文龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶及其致病机理的研究Cell-walldegradingenzymesproducedbyPhomopsislonganaeChi.anditspathogenicityforlonganfruitAbstractPhomopsislonganaeChi.isanimportantpathogenicfungionlatentperiodinlonganfruits.Duringtheprocess

7、ofpathogenicity,itcanproducemanykindsofenzymesindiseasedevelopment.Acell-walldegradingenzymes(CWDEs)producedinPhomopsislonganaeChi.wasisolatedbyourlaboratoty.Studythecell-walldegradingenzymes(CWDEs)byPhomopsislonganaeChi.andtheirpathogenicitytolonganfruit

8、sandthephenolicsinhibitionforitcouldmakeusbestunderstingaboutpathogenicmechanismsofplantpathogensandcontrolthepost-harvestlonganfruitdiseases.Theresultswereasfollows:1、ThecrudeCWDEsproducedbyPhomopsislonganaeChi.Ini