胸腺素β4在Tenon囊成纤维细胞中的表达及CTGF对其表达的影响

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1、华中科技大学硕士学位论文胸腺素β4在Tenon囊成纤维细胞中的表达及CTGF对其表达的影响华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科硕士研究生：穆歌导师：曹阳副教授摘要目的：胸腺素β4（thymosinβ4Tβ4）是一种重要的G-肌动蛋白偶联蛋白,参与调控不同组织的炎症反应和创伤愈合，本实验的目的是从分子生物化学水平检测人Tenon囊成纤维细胞(humanTenon’scapsulefibroblasts,HTFs)中Tβ4的表达，并研究结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)对其表达的影响。方法：体外培养原代HTFs，传代后取3~4代细胞进行

2、实验。一步法提取HTFsRNA，应用RT-PCR检测Tβ4mRNA的表达，并用免疫组化法检测细胞中Tβ4蛋白的表达。选用终浓度为0ng/ml（对照组）、1.0、10.0及100.0ng/mlCTGF处理上述细胞24小时，半定量RT-PCR反应观察CTGF对体外培养HTFsTβ4mRNA表达的影响，以β-actin作为内参照。实验结果：RT-PCR扩增得到单一产物，免疫组化结果显示Tβ4在体外培养的HTFs胞浆中表达阳性，胞核中表达阴性。半定量RT-PCR检测结果经图像分析得到，1.0、10.0及100.0ng/mlCTGF处理组的Tβ4/β-actin的吸光度比值分别为1.11±0.0

3、4，1.05±0.03，0.82±0.06，与对照组比值1.23±0.02比较差异有显著意义（P<0.05）。Tβ4/β-actin随着CTGF的浓度增大而降低，呈剂量依赖性。结论：体外培养的HTFsTβ4表达阳性。CTGF抑制HTFs中Tβ4的表达，这可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化发生的机制之一。关键词：胸腺素β4；CTGF；人Tenon囊成纤维细胞；滤过泡瘢痕化；青光眼1华中科技大学硕士学位论文ExpressionofThymosinbeta4inHumanTenon’sCapsuleFibroblastsandtheEffectofCTGFonitsExpressionCand

4、idate:MuGeSupervisors:Prof.CaoYangDepartmentofOphthalmology,UnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyAbstractPurpose:Thymosinbeta4(Tβ4)isamainactin-sequestratingpeptidethatmodulatesinflammationandhealingindifferenttissues.Thepurposeofthisstudywastoinvestigatethe

5、molecularandbiochemicalexpressionofTβ4inhumanTenon’scapsulefibroblasts(HTFs)andtoinvestigatetheeffectofconnectivetissuegrowthfactor(CTGF)ontheexpressionofTβ4.Methods:TotalRNAfromcultured3-4passageHTFsinvitrowasextractedwithTRIZOLreagent.Tβ4messengerRNAwasmeasuredbyreversetranscriptase-polymerase

6、chainreaction(RT-PCR).AnimmunohistochemicalstainwasusedtodetectTβ4protein.Aftertreatedwith0ng/ml（control）,1.0,10.0and1.0ng/mlCTGFfor24h，Tβ4expressionincultured3-4passagehumanTenon’scapsulefibroblastswasmeasuredbysemi-quantitativeRT-PCR.Results:AsingleRT-PCRamplifiedproductwasobtained.Tβ4immunohi

7、stochemicalstainingwaspositiveincytoplasmofHTFs,whilenegativeinnucleus.Theresultofthesemi-quantitativeRT-PCRwasanalyzedbyimageanalysis.Respectively,treatedwith1.0,10.0and100.0ng/mlCTGF,thevaluesofTβ4/β-actinwere1.11±0.04，1.0