实验五 微生物培养基配制与灭菌

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1、实验五微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐2.特殊营养：维生素、生长因子等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：细菌：6.5-7.5；放线菌：7.5-8.5；真菌：5.0-6.0。4.

2、种类：固体培养基液体培养基有无凝固剂琼脂分离鉴定工业生产化学成分：物理性质：天然培养基合成培养基微生物培养基的配制与灭菌目的要求1.明确培养基的配制原理和方法，掌握其配制的一般方法和步骤。2.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。（预习）培养基配制原则⑴目的明确：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当⑶适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研培养基的配制方法和步骤称量：按照配方正确称

3、取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，溶解。调pH值：用1NNaOH或1NHCl调pH，用pH试纸对照。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。过滤分装包扎，挂上标签（灭菌指示条），注明何种培养基和配制时间。灭菌：1210C20min倒置平板检查：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。按培养基配方称量加水加热熔化调节pH值过滤分装包装灭菌检查灭菌彻底与否培养基的配制和灭菌过程中的注意事项1.蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。3.在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾

4、而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。4.pH不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。5.分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免引起污染。2.称药品时严防药品混杂，一把牛交匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。培养基配制–器材培养基、玻璃器皿天平秤、药匙培养基的配制–装水以量桶装取适当量蒸馏水于玻璃容器中于玻璃容器上标示培养基名称培养基配制–秤药放上秤药纸并归零以秤药匙舀出适当量培养基(请看培养基罐上说明

5、)培养基配制–溶解培养基倾倒培养基时小心不要沾到玻璃壁上注意事项–配药结束清理配药桌面与天平清洗秤药匙，擦干放回药品放回药品柜培养基配制–分装调整分注器(Dispensette)刻度分装试管盖上试管盖6.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。不能灭菌的物质：1.爆炸性物质硝化丙烷、硝化甘油、硝化纤维，含氮硅酯。三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性含氮复合物。过醋酸、过氧化甲乙酮、过氧化苯甲酰和其它过

6、氧化有机物。2.lgnitable物质金属锂、钾、钠、黄磷、氧化硫，和红磷。培养基的配制和灭菌过程中的注意事项实验室的常用培养基：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；放线菌：高氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于分离和培养细菌的基础培养基，又称天然培养基。配方如下：牛肉膏3g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂20g自来水1000mLpH7.2~7.4淀粉琼脂培养基（高氏一号），用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基。配方如下：可溶性淀粉20.0gKNO31.0gK2HPO40.5gMgSO4•7H2O0.

7、5gNaCl0.5gFeSO4•7H2O0.01g琼脂20g自来水1000mLpH7.4－7.6查氏培养基，用于分离和培养霉菌，是一种合成培养基。配方如下：NaNO32.0gK2HPO41.0gKCl0.5gMgSO40.5gFeSO40.01g蔗糖30g琼脂20g自来水1000mLpH自然LB(Luria-Bertani)培养基1000mlLB培养基的配方H2O定容至1000mL胰蛋白胨(Tryptone)10g氯化钠（NaCl）10g琼脂（agar）15g酵母提取物(Yeast extract)5g20gYPD培养基foryeast1000

8、mlYPD培养基的配方H2O定容至1000mL蛋白胨(peptone)20g琼脂（agar）20g酵母提取物(Yeast extract)10g葡萄糖