银荆感冒颗粒抗乙型流感病毒的药效学研究

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1、银荆感冒颗粒抗乙型流感病毒的药效学研究邱召娟，朱萱萱，倪文澎，严士海，朱琼【摘要】　　目的研究银荆感冒颗粒对乙型流感病毒（B/京防98-96）的抑制作用。方法体外接种乙型流感病毒鼠肺适应株于狗肾细胞(MDCK)，观察银荆感冒颗粒体外抗病毒作用；体内实验①以乙型流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染小鼠，观察14d，计算小鼠存活率及存活天数；体内实验②以乙型流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染小鼠，观察肺指数。结果银荆感冒颗粒体外抗乙型流感病毒EC50为3.68mg/ml。银荆感冒颗粒10g/kg和20g/kg剂量组可明

2、显延长乙型流感病毒感染小鼠存活天数，降低死亡率；银荆感冒颗粒20g/kg剂量组可明显抑制肺指数值，抑制率为36.7%。结论银荆感冒颗粒对乙型流感病毒有一定的抑制作用。【关键词】银荆感冒颗粒乙型流感病毒体内外抑制　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectofYinjingganmaogranuleonInfluenzaBVirus.MethodsTheinhibitorycytopathiceffects(CPE)ofYinjinggan

3、maogranuleentinvivoethods：(1)Themiceaogranulefor7daysand30μlInfluenzaBVirusbynoseatsequentiluce.IMedium1640，GIBCO公司；胰蛋白酶，上海伯奥生物技术有限公司，批号020602；HEPES，江苏科威技术服务有限公司，批号H3375；磷酸氢二钠，南京化学试剂厂，批号051207；磷酸二氢钾，广西西陇化工厂，批号041119；碳酸氢钠，上海虹光化工厂，批号050622；新生牛血清，杭州四季青生物

4、工程材料有限公司，批号050827；青霉素，山东鲁抗医药股份有限公司，批号8040613；链霉素，大连美罗大药厂，批号040707；乙醚,南京试剂厂,批号050628。　　1.2仪器　　CO2培养箱（BB16）,Beracus公司；倒置显微镜（XSZ-D2），重庆光学仪器厂；微孔滤器，上海医药工业研究院；细胞培养板，丹麦NUNC公司；净化工作台（SDCK)，购自上海细胞所。　　1.4动物ICR小鼠，♀♂兼用，体重16～24g，由南京青龙山动物饲养厂提供，合格证号：SCZK（苏）2001-0018。

5、　　2方法　　2.1银荆感冒颗粒体外对乙型流感病毒的作用　　2.1.1MDCK细胞培养新购置的MDCK细胞，用0.25%的胰酶消化，然后加入含血清培养液适量，轻轻吹打均匀，按1∶3比例进行分瓶传代。实验前则接细胞于96孔培养板中，培养24h后，用于实验。　　2.1.2病毒毒力测定将冻存的病毒液快速冻融后，按10倍稀释法稀释成10-1～10-9的不同稀释液，接种到MDCK细胞培养板中，每个浓度4个孔，每孔接种150μl病毒液，于5%CO2，37℃静置培养，同时设正常细胞对照，4个复孔，观察细胞病变情

6、况，以CPE不再进展时,按Reed-Muench氏法〔1〕计算病毒滴度，即该病毒的TCID50。CPE程度：－，无细胞病变；+，25%细胞病变；＋＋，50%细胞病变；＋＋＋，75%细胞病变；＋＋＋＋，100%细胞病变。　　2.1.3银荆感冒颗粒最大无毒浓度实验银荆感冒颗粒（浸膏），每毫升相当于4.9g药材，首先将原浸膏稀释成1g/ml，再用完全培养液稀释成100mg/ml，最后用完全培养液将其分别稀释成80，40，20，10，5，2.5mg/ml的不同浓度加入长成单层MDCK细胞的96孔培养板中，

7、每个浓度4个复孔，每孔150μl同时设立正常细胞对照组，置培养箱中培养，观察细胞的生长情况，观察病变情况，以不出现细胞变暗、变圆、融合、脱落等病变的最大药物浓度为该药物的无毒性浓度。　　2.1.4银荆感冒颗粒TC50测定根据最大无毒浓度实验结果，将银荆感冒颗粒稀释成不同浓度，加入长成单层MDCK细胞的96孔板，每个浓度4个复孔，150μl/孔，同时设立正常的细胞对照组，置培养箱中培养，观察细胞的生长情况，观察病变情况，采用孙氏综合法〔2〕计算该药物对细胞的TC50〔2〕。CPE程度：－，无细胞病变

8、；+，25%细胞病变；＋＋，50%细胞病变；＋＋＋，75%细胞病变；＋＋＋＋，100%细胞病变。　　2.1.5银荆感冒颗粒对乙型流感病毒的作用已长成单层的细胞接种剂量为10TCID50的病毒，置37℃，5%CO2温箱孵育2h，弃去含病毒维持液，更换含不同浓度药物的维持液，置培养箱内培养。每天观察细胞形态，连续观察3d，记录CPE程度，同时设立正常细胞对照组、病毒对照组各四孔，采用孙氏综合法计算药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI)。治疗指数(TI)=TC50/EC50。CP