糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3t3–l1脂肪细胞炎症因子的影响论文

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1、糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3T3–L1脂肪细胞炎症因子的影响论文牛洁刘铜华王志程杨丽霞【摘要】目的：探讨糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3T3–L1脂肪细胞炎症因子的影响。方法：通过地塞米松与胰岛素共同诱导3T3–L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型，检测中药糖耐康对细胞上清中TNF–α、IL–6、CRP水平的影响。结果：与正常组比较，模型组TNF–α、IL–6、CRP水平明显升高；经中药糖耐康以及西药吡格列酮干预后，TNF–α、IL–6、CRP水平显著下降，与模型组比较有显著差异。结论：TNF–α、IL–6、CRP参与胰岛素抵抗的发生，中药糖耐康可能通过

2、降低炎症因子的水平发挥改善胰岛素抵抗的作用。【关键词】糖耐康；3T3–L1脂肪细胞；胰岛素抵抗；炎症〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofTangnaikanggranuleoninflammatoryfactorofinsulin-resistant3T3-L1adiopocytes.MethodsAfterutilizingdexamethasoneandinsulintoestablishinsulin-resistantmodlebyinduced3T3–L1adipocyte,theleve

3、lsoftumornecrosis-alpha(TNF–α),interleukin–6(IL–6)andC–reactiveprotein(CRP)ofcellsupernatantodelgroupalgroup.AfterinterventionofTangnaikangandPioglitazone,thelevelsofTNF–α,IL–6andCRPodelgroup.ConclusionTheinflammatoryfactorofTNF–α,IL–6andCRPparticipatedtheformationofinsu

4、linresistance,Tangnaikangcoulddegradetheinflammatoryfactorlevelstoimprovetheinsulinresistance.〔Keyellitus，T2DM）发病中的主要环节，其形成机制复杂.freela公司；葡萄糖检测试剂盒购自国药集团化学试剂北京有限公司；TNF–α抗体试剂盒，IL–6抗体试剂盒，CRP抗体试剂盒均购自美国RB公司。1.2实验药品糖耐康颗粒（人参、夏枯草、女贞子、番石榴叶、三白草组成）：9g/袋，由四川美大康佳乐药业有限公司生产提供；盐酸吡格列酮片（艾汀

5、）：15mg/片，购自北京太洋药业有限公司。1.3主要仪器CO2孵育箱：BB16/BB5060型，德国Heraeus公司；超净工作台：半导体设备一厂生产；台式高速冷冻离心机：ST–21型，美国索福公司；高压蒸汽消毒器：HVE–50型，日本HIRAYAMA公司；电热恒温培养箱：HHB11420型，天津实验仪器厂生产；低速自动平衡微量离心机：LDZ4–0.8型，北京医用离心机厂生产；倒置显微镜：日本Nikon公司；酶标仪：MultiscanMK3型；实验耗材：美国COSTAR公司。1.4方法1.4.13T3–L1前脂肪细胞诱导分化2将3T3

6、–L1前脂肪细胞置于含10%新生牛血清的DMEM高糖培养基中，37℃，5%CO2饱和湿度下培养。细胞状态良好时接种于培养板，待细胞融合2d后，换用含10%新生牛血清、0.5mmol/LIBMX、10μg/mL胰岛素、0.25μmol/LDEX的DMEM高糖培养基（即诱导溶液1）培养48h，后换用含10%新生牛血清、10μg/mL胰岛素（即诱导溶液2）再培养48h，随后以10%新生牛血清的DMEM高糖培养基继续培养，2d换1次培养液，诱导分化8~12d的3T3–L1前脂肪细胞90%以上可分化为成熟的脂肪细胞，进行油红“O”染色鉴定为脂肪细

7、胞后，方可用于实验。1.4.2脂肪细胞鉴定采用油红“O”染色法，具体过程如下：将诱导分化结束的脂肪细胞，先用PBS洗3次以除去培养基；中性甲醛固定10min，然后水洗，将细胞晾干20min；加入油红“O”染液染色30min（密封）；再用60%异丙醇冲洗，以除去多余的染料，然后水洗；加入苏木素复染细胞核2min，用水冲洗；稍干后以甘油明胶封固；在倒置显微镜下观察。1.4.33T3–L1胰岛素抵抗细胞模型的建立3，4将成熟的3T3–L1脂肪细胞用含DEX1μmol/L、Insulin10nmol/L及10%新生牛血清的DMEM培养基孵育96

8、h，后取培养液上清，采用葡萄糖氧化酶法，以培养基中的葡萄糖的消耗量反映胰岛素抵抗情况，建立胰岛素抵抗细胞模型。1.4.4含药血清的制备健康雄性组、TNKH组以及BG组改善最为明显。TNKH组可显著降低IR细