糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3t3–l1脂肪细胞炎症因子的影响

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1、糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3T3–L1脂肪细胞炎症因子的影响【摘要】目的：探讨糖耐康颗粒对胰岛素抵抗3T3–L1脂肪细胞炎症因子的影响。方法：通过地塞米松与胰岛素共同诱导3T3–L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型，检测中药糖耐康对细胞上清中TNF–α、IL–6、CRP水平的影响。结果：与正常组比较，模型组TNF–α、IL–6、CRP水平明显升高；经中药糖耐康以及西药吡格列酮干预后，TNF–α、IL–6、CRP水平显著下降，与模型组比较有显著差异。结论：TNF–α、IL–6、CRP参与胰岛素抵抗的发生，中药糖耐康可能通过降低炎症因子的水平发挥改善胰岛素抵抗的作用。【关键词】糖耐康；3T3–

2、L1脂肪细胞；胰岛素抵抗；炎症〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofTangnaikanggranuleoninflammatoryfactorofinsulin-resistant3T3-L1adiopocytes.MethodsAfterutilizingdexamethasoneandinsulintoestablishinsulin-resistantmodlebyinduced3T3–L1adipocyte,thelevelsoftumornecrosis-alpha(TNF–α),interleukin–6(IL–6)andC–re

3、activeprotein(CRP)ofcellsupernatantodelgroupalgroup.AfterinterventionofTangnaikangandPioglitazone,thelevelsofTNF–α,IL–6andCRPodelgroup.ConclusionTheinflammatoryfactorofTNF–α,IL–6andCRPparticipatedtheformationofinsulinresistance,Tangnaikangcoulddegradetheinflammatoryfactorlevelstoimprovetheins

4、ulinresistance.〔Keyellitus，T2DM）发病中的主要环节，其形成机制复杂，近年来研究提示IR是个慢性非特异性炎症过程，慢性炎症参与了IR的发生与发展[1]。因此，干预炎症过程，改善IR将成为防治T2DM的新趋势。故本实验以炎症–IR为切入点，通过观察中药复方糖耐康对胰岛素抵抗3T3–L1脂肪细胞中炎症因子水平的影响，为其防治IR及T2DM提供可靠依据。1材料与方法1.1主要材料3T3–L1前脂肪细胞株购自ATCC；DMEM高糖培养基，新生牛血清均购自GIBCO公司；牛胰岛素，3–异丁基–1–甲基黄嘌呤（IBMX），地塞米松（DEX），油红“O”染剂均购自S

5、igma公司；葡萄糖检测试剂盒购自国药集团化学试剂北京有限公司；TNF–α抗体试剂盒，IL–6抗体试剂盒，CRP抗体试剂盒均购自美国RB公司。1.2实验药品糖耐康颗粒（人参、夏枯草、女贞子、番石榴叶、三白草组成）：9g/袋，由四川美大康佳乐药业有限公司生产提供；盐酸吡格列酮片（艾汀）：15mg/片，购自北京太洋药业有限公司。1.3主要仪器CO2孵育箱：BB16/BB5060型，德国Heraeus公司；超净工作台：半导体设备一厂生产；台式高速冷冻离心机：ST–21型，美国索福公司；高压蒸汽消毒器：HVE–50型，日本HIRAYAMA公司；电热恒温培养箱：HHB11420型，天津实验

6、仪器厂生产；低速自动平衡微量离心机：LDZ4–0.8型，北京医用离心机厂生产；倒置显微镜：日本Nikon公司；酶标仪：MultiscanMK3型；实验耗材：美国COSTAR公司。1.4方法1.4.13T3–L1前脂肪细胞诱导分化[2]将3T3–L1前脂肪细胞置于含10%新生牛血清的DMEM高糖培养基中，37℃，5%CO2饱和湿度下培养。细胞状态良好时接种于培养板，待细胞融合2d后，换用含10%新生牛血清、0.5mmol/LIBMX、10μg/mL胰岛素、0.25μmol/LDEX的DMEM高糖培养基（即诱导溶液1）培养48h，后换用含10%新生牛血清、10μg/mL胰岛素（即诱导

7、溶液2）再培养48h，随后以10%新生牛血清的DMEM高糖培养基继续培养，2d换1次培养液，诱导分化8~12d的3T3–L1前脂肪细胞90%以上可分化为成熟的脂肪细胞，进行油红“O”染色鉴定为脂肪细胞后，方可用于实验。1.4.2脂肪细胞鉴定采用油红“O”染色法，具体过程如下：将诱导分化结束的脂肪细胞，先用PBS洗3次以除去培养基；中性甲醛固定10min，然后水洗，将细胞晾干20min；加入油红“O”染液染色30min（密封）；再用60%异丙醇冲洗，以除去多余的染料，然后水洗；加入