人脐带胶质间充质干细胞的分离培养与特性分析

《人脐带胶质间充质干细胞的分离培养与特性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、-摘要细胞治疗已经走过十多年的历程，起初科学家对免疫细胞进行大量研究，如细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗癌症具有可观的前景；而目前科学界对人脐带间充质干细胞（Humanumbilicalcordmesenchymalstemcell,hUC-MSC）的研究较为关注，由于hUC-MSC比胚胎干细胞（ESC）、骨髓间充质干细胞（BM-MSC）等具有更好的临床应用潜能，从而成为人类再生医学和组织工程的研究热点。本研究目的是探索更有效的hUC-MSC分离培养方法和进一步研究hUC-MSC生物学特性，

2、通过建立优化的实验方法，能为再生医学科研和临床应用提供操作规范标准和参考依据。方法：实验随机选取足月顺产健康胎儿脐带，采取手工机械分离法和3种酶组合消化法从脐带胶质中释放人脐带间充质细胞；并用优化完全培养基纯化培养；MTT法检测各代脐带间充质细胞生长增殖活性并绘制生长曲线；流式细胞术检测脐其生长周期和表面标志物；RT-PCR扩增基因P53、C-myc和OCT-4；结果：培养脐带间充质细胞形态为梭形、呈纤维样，并出现流水状或漩涡样生长；生长增殖速度较快，第7代脐带间充质细胞指数倍增时间小于30h；

3、80%以上细胞处于G0/G1期；培养脐带间充质细胞均一稳定高表达CD29、CD70、CD105、CD90和CD44，而几乎不表达CD45、CD34和HLA-DR；P53基因在各代脐带间充质细胞均有表达，C-myc基因在第4代和第18代出现明显表达，OCT-4基因在不同代数均出现表达；结论：1）1h可分离30cm脐带胶质，获得的大量脐带间充质细胞（9´104/cm），经培养检测证明具有hUC-MSC的形态特征、增殖活性，表面抗原一致，是原始的hUC-MSC；2）通过RT-PCR检测各代脐带间充质细

4、胞的P53、C-myc和OCT-4基因，发现培养10代以内hUC-MSC状态较正常。本研究意义：提示在临床应用hUC-MSC时，对其癌基因和抑癌基因全面检测以及衰老凋亡系统检测很有必要；本实验可为短期培养扩增出临床治疗所需要安全可靠的MSC提供研究基础，可为避免hUC-MSC体内移植治疗产生致瘤性提供参考依据。关键词：脐带胶质；人脐带间充质细胞；人脐带间充质干细胞---Isolation,CulturingandCharacterizationofMesenchymalStemCellsDeri

5、vedfromHumanUmbilicalCordAbstractCelltherapyhasmoretenyearsprogress.Atfirst,scientistsabundancelystudiedimmunocyte,suchascytokine-inducedkillercellstheatingcancerthathadconsiderableprospect;Moreovernowscientiststopaycloseattentiontohumanumbilicalcord

6、mesenchymalstemcell(hUC-MSC),becausehUC-MSChasmoregoodclinicalpracticeproficiencythanembryonicstemcellandbonemarrowmesenchymalstemcell,therebybecomereseachinghotspotofhumanmedicineandtissueengineering.Thepueposeofthisstudywasexploringamoreeffectiveis

7、olationandculturingmethodofhUC-MSC,andfurtherstudiedbiologicalcharacterizationofhUC-MSC.Passingsetingupoptimizedtestmethod,mayofferreferenceaccordingofoperatingspecification.Method:trialrandomchosetwentyfulltermnaturallabourhealthyfetusumbilicalcords

8、,adoptedmanualmechanicalseparatingprocessandthecombinedenzymedigestingwaytoobtainmesenchymalcell;UmbilicalcordmesenchymalcellobtainedwasculturedbyoptimizedDMEM/F12;TheproliferationactivityofseveralpassageumbilicalcordmesenchymalcellwasdetectedbyMTT,A