人脐带静脉灌注液间充质干细胞的分离和鉴定

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1、人脐带静脉灌注液间充质干细胞的分离和鉴定作者：刘晓丹，刘兵，李秀森，毛宁【摘要】本研究旨在探讨人脐带静脉灌注液中是否存在间充质干细胞及其分离和扩增方法。从正常产妇分娩后的脐带静脉灌注液分离间充质干细胞，观察细胞形态并用流式细胞仪分析其细胞表型和细胞周期，在体外分别诱导其成骨、成脂肪和成软骨细胞分化。结果表明：脐带静脉灌注液来源的间充质干细胞为成纤维细胞样，高表达CD29、HLAABC、CD166、CD105、CD73、CD44；不表达造血和内皮标志（CD34、CD45、CD144和CD14）。它们可向骨、脂肪和软骨细胞分化，符合间充质干细胞的基本功能特征。结论：人脐带静脉灌注液存

2、在间充质干细胞，能够在体外培养和扩增，可作为今后细胞治疗和组织工程的种子细胞。【关键词】脐带静脉灌注液IsolationandIdentificationofMesenchymalStemCellsfromPerfusionofHumanUmbilicalCordVEinAbstractThisstudyedtoinvestigateesenchymalstemcells(MSCs)existedinhumanumbilicalcordvEInandtoestablishthemethodsofisolationandexpansioninvitro.TheMSCsdirevedf

3、orperfusionofumbilicalcordvein(UVMSCs)en.ThemorphologyofMSCsandtheirdifferentiationpotentialintoosteoblast,adipocyteandchondrocyteinedbyusingfloetry.Theresultshoesenchymalstemcellsseparatedfromumbilicalcordveingaverisetoapopulationofadherentcellsorphology.Similarlytobonemarroatopoieticandendot

4、helialmarkers(CD45,CD34,CD14andCD144).Functionally,theycoulddifferentiateintotheosteoblast,adipocyteandchondrocyte.ItisconcludedthatMSCsexistinthehumanumbilicalcordveinperfusion.Theirreadamplificationinvitrocontributetoclinicalapplicationsforcelltherapyandtissueengineering.Keyesenchymalstemcel

5、l;umbilicalcordveinperfusion;cellisolation;cellidentification间充质干细胞（mensenchymalstemcells,MSC）最早自骨髓中分离，是一类具有自我更新及多向分化潜能的中胚层源干细胞［1］。作为多种骨髓基质的前体细胞，MSC能通过调节造血微环境以促进造血干细胞增殖、分化，它亦能调节淋巴细胞免疫功能，从而减轻移植排斥反应等生物学效应［2］。MSC的发现为针对性解决造血干细胞移植，尤其是脐血移植中的干细胞数量相对不足及减轻移植物抗宿主病提供了一个有效手段［3，4］。然而，临床上骨髓取材困难，供体有限，随年龄的增加其

6、增殖和分化能力下降，且有病毒污染的可能［5］。因此，寻找MSC的新来源具有重要意义。本研究从易于获取、且组织来源较为原始的脐带静脉灌注液中寻找MSC（UVMSC），并对其进行生物学特性的鉴定。材料和方法材料与试剂脐带来自北京市中西医结合医院正常分娩产妇，均经父母授权同意。Ⅳ胶原酶为Sigma公司产品，αDMEM为Hyclone公司产品，胎牛血清为FBS，StemCell产品，L谷氨酰胺为Amresco公司产品，EGF为Peprotech公司产品，rhVEGF为RD公司产品，bFGF为双鹭药业公司产品，胰蛋白酶为Amresco公司产品，诱导试剂：地塞米松、β甘油磷酸钠、抗坏

7、血酸磷酸盐、3异丁酸1甲基黄嘌呤（IBMX），胰岛素、消炎痛、丙酮酸钠均为Sigma公司产品，TGFβ3为RD公司产品，ITSA为Sigma公司产品；流式相关鼠抗人单克隆抗体：CD29PE、CD166PE、CD14、CD144PE、CD34FITC、CD45FITC、HLAABCFITC、HLADRFITC、CD44FITC、CD105FITC均为BectonDickinson公司产品），碱性磷酸酶检测试剂盒为Sigma公司产品。中国实