地蚕指纹图谱的初步研究

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1、地蚕指纹图谱的初步研究【摘要】目的建立地蚕药材的反相高效液相色谱（RP-HPLC）指纹图谱研究方法。方法高效液相色谱法，LichrospherC18柱（5μm，4.6mm×250mm），乙腈-0.25%磷酸水梯度洗脱,流速1.0ml/min，检测波长350nm，柱温35℃。结果10批药材共标定了25个共有峰。结论利用地蚕RP-HPLC指纹图谱分析方法较全面地反映地蚕药材的内在质量，可用于地蚕药材的质量控制。【关键词】地蚕指纹图谱地蚕又名肺痨草，为唇形科水苏属植物地蚕StachysgeobombycisC.Y.水系滤膜过滤。2方法与结果2.1色谱条件色谱Lichrosp

2、herC18柱(5μm,4.6mm×250mm)，检测波长为350nm，进样量10μl，柱温35℃，流速1.0ml/min，流动相梯度如表1，记录时间为100min。此条件下对照品金丝桃苷的保留时间18.773min。2.2供试品溶液的制备精密称定粉碎后的地蚕样品约5g，加入75ml甲醇，回流30min，滤过，将药液浓缩至干，用少量水溶解，分别用石油醚和醋酸乙酯依次萃取，醋酸乙酯层浓缩至干，甲醇定容于5ml量瓶中，摇匀，微孔滤膜滤过，即得。表1流动相梯度2.3对照品溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品1mg，用甲醇溶解，定容于25ml量瓶中(浓度为40μg/ml)，摇匀即

3、得。2.4方法学考察取地蚕样品进行指纹图谱预试验，按上述色谱条件，可得到分离度较好、各峰分布较均匀的指纹图谱，并着重选择了地蚕峰面积较大的13个峰，进行方法学考察。2.4.1精密度实验精密吸取供试品溶液10μl，按上述色谱条件，连续进样5次，记录色谱图。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面积比值基本一致，RSD均小于3.0%，符合指纹图谱色谱技术要求。2.4.2稳定性实验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0，2，4，8，12，24h进样检测，记录色谱图。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值基本一致，RSD均小于3.0%，说明供试品溶液在24h

4、内稳定，符合指纹图谱技术要求。2.4.3重复性实验分别精密称定同一批药物5份，同法制备样品，进样，记录色谱图。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值基本一致，RSD均小于3.0%，符合指纹图谱技术要求。2.5指纹图谱及技术参数〔4〕2.5.1指纹图谱选择及特征峰的标定根据10批供试品HPLC图谱，选择7号供试品作为对照指纹图谱（见图1）。地蚕药材中金丝桃苷为其主要成分，从指纹图谱中可以看出金丝桃苷色谱峰（保留时间RT≌18.833min，峰面积百分比A%≌20.05%）积分面积最大，作为参照峰，同时得到各批次地蚕药材25个共有峰。图1地蚕药材的对照指纹图谱2

5、.5.2地蚕指纹图谱相似度计算按上述实验方法检测10批地蚕药材的指纹图谱（见图2），应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(A版，国家药典委员会)计算10批药材的相似度，结果分别为：0.980，0.925，0.945，0.972，0.986，0.978，1.000，0.991，0.968，0.967。图210批地蚕药材的指纹图谱2.5.3共有峰相对保留时间及相对峰面积的比较参照《中药注射液指纹图谱研究的技术要求(暂行)》〔4〕，对地蚕药材进行HPLC色谱指纹图谱测定分析，以参照物金丝桃苷(2号峰)的保留时间和峰面积为1，计算10批指纹图谱中25个共有峰的相对保留时间及相对

6、峰峰面积。见表2～3。表210批供试品共有特征指纹峰相对保留时间3讨论3.1样品来源10批地蚕药材均源于唇形科植物地蚕StachysgeobombycisC.Y.〕.北京：中国医药科技出版社，1993：1948.〔2〕张中朋，杨中林，唐登峰，等.地蚕化学成分的分离与鉴定〔J〕.中成药，2004，26（12）：1051.〔3〕YangZL,TangDF,ChengQH,etal.TheparedstudyofHyerosideintheaerialpartanditsrehizomeofstachysgeobombycisC.Y.，2003，20(4)：24.〔4〕周玉

7、新，雷海明，徐永红，等.中药指纹图谱研究技术〔M〕.北京：化学工业出版社，2002：131.〔5〕国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部〔S〕.北京：化学工业出版社，2005：22.