安徽产山银花hplc指纹图谱初步研究

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1、安徽产山银花HPLC指纹图谱初步研究摘要：目的建立安徽不同产地金银花HPLC色谱指纹图谱。方法以超声法制备供试液，采用高效液相色谱法，甲醇和0.05%磷酸为流动相，紫外检测波长327nm，柱温30℃，流速：0.8ml/min。结果分析了10个批号不同产地的山银花药材，确定了4个共有峰，可作为其指纹特征。结论所建立的图谱具有稳定、重现的特点，为全面控制安徽不同产地山银花的质量提供了依据。关键词：山银花；指纹图谱；HPLC为全面评估本地区山银花及其提取物有效成分的变化及差异，以及进一步探讨其内在规律和控制质量，实验采用HPLC法建立了安徽不同产区采集的山银花及其提取物的指纹图谱。本研究采

2、用高效液相色谱法建立了不同产地山银花药材的HPLC指纹图谱分析方法。并对不同产地山银花药材指纹图谱进行比较归纳，以便比较完整地反映山银花的内在化学信息，并运用”中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”（国家药典委员会）进行相似度分析。以达到符合国家药典委员会颁布的《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南（试行）》中相关规定[1]。为山银花药材鉴别和质量评价提供了依据，同时也为山银花在治疗人类疾病中发挥其安全性，稳定性和可控性提供科学的依据。51资料与方法1.1样品安徽产山银花10批，编号S1～S10，经南京中医药大学刘圣金博士鉴定，各样品均符合2010年版《中国药典》的规定。1.

3、2对照品绿原酸对照品（chlorogenicacid，纯度=98%，购自中国食品药品检定研究院，批号0751-201011）。1.3试剂磷酸（分析纯）；甲醇（分析纯）；甲醇（色谱纯）；超纯水（用前需通过溶剂过滤器过滤，超声脱气后使用）。1.4仪器Waters2695（separationModule）+waters2487（检测仪）；色谱柱（WatersBridgeC185μm，4.6×150mmcolumn）；溶剂过滤器；科生牌超声清洗机（KS-120EI；功率120W；40KHZ）；循环水式多用真空泵（SHB-III；180W；50KHZ，郑州长城工贸有限公司）。2方法与结果2.

4、1色谱条件查阅参考资料[2]，并通过预实验确定测定绿原酸含量的色谱条件，色谱柱：采用watersBridgeC18柱（5μm，4.6mm×150mm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸（体积比12：88）；流速：0.8ml/min；检测波长：327nm；柱温：30℃；进样量：10μl。52.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品约4.000mg～10mL棕色量瓶内，用50%甲醇（色谱纯）溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为0.4mg/ml的对照品溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取山银花样品于50℃过夜烘干，粉碎后过65目筛（四号筛）备用。称取备用山银花粉末约1.0g，精密称定，置具塞

5、锥形瓶中，加入50%甲醇溶液50mL，超声处理1h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取5ml续滤液，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇定容得供试品溶液。2.4方法学考察2.4.1精密度实验取同一批次供试品（1号样品），连续进样5次，考察色谱峰相似度的一致性，用”中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”（国家药典委员会）计算，结果相似度大于0.9，表明仪器精密度良好。2.4.2稳定性实验取同一批次供试品（1号样品），分别在0、2、4、8、12、18、24h不同时间点进行检测，用”中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”（国家药典委员会）计算，结果

6、相似度大于0.9，表明仪供试品溶液在24h内稳定。2.4.3重复性试验5取同一批次样品（1号样品），按上法分别制备5份供试品，平行测定，考察色谱峰相似度的一致性，用”中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”（国家药典委员会）计算，结果相似度大于0.9，表明实验重复性良好。2.5指纹图谱的建立按上述方法测定10批样品的指纹图谱，分析确定10批样品共标出4个共有指纹峰（见图1），其保留时间（min）（见表1）。其中3号峰为绿原酸峰，其峰面积较大，且较稳定，故选择其为参照峰，计算其它3个共有峰相对保留时间依次为：0.125（1）、0.430（2）、1.134（4）。2.6指纹图谱相似度

7、计算将l0批样品的指纹图谱导入”中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”（国家药典委员会）设置参照谱、匹配谱峰、生成对照图谱和相似度计算，得出各样品HPLC图之间和生成的对照样本图谱R的相似度。3讨论提取方法的选择：超声提取法操作简便、节约时间，故采用超声法。本实验只考察提取溶媒（不同浓度甲醇以及不同浓度乙醇、溶剂体积）及提取时间对提取效果的影响。结果以50ml50%甲醇超声提取1h的含量最高，杂质峰较少。色谱条件优化：分别考察了乙腈-0.4%磷酸溶液