混合系白血病基因重排的检测方法及其临床意义

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1、混合系白血病基因重排的检测方法及其临床意义【摘要】为了研究混合系白血病（MLL）基因重排在急性白血病(AL)中的发生率、融合基因类型及其临床意义，用荧光原位杂交技术检测60例急性白血病（AL）患者MLL基因重排，对于MLL基因重排阳性的患者，用巢式RTPCR方法检测MLL基因重排形成的6种常见融合基因类型。结果表明：7例AL患者有MLL基因重排，发生率为11.67%，其中2例为急性髓细胞白血病M5（AMLM5），融合基因均为MLL／AF9；另5例为B细胞系急性淋巴细胞白血病（BALL），其中2例融合基因为MLL／ENL，1例MLL／AF4，2例未扩增出融合基因产物。结论：荧光原位杂交技术

2、是检测ALMLL基因易位重排的快速、特异、灵敏的方法，巢式RTPCR是检测MLL基因重排产生的融合基因类型的简便可行的方法；MLL基因重排的检测对急性白血病预后判断和治疗方案的选择具有重要意义。【关键词】急性白血病混合系白血病基因基因重排荧光原位杂交巢式RTPCRDetectionofRearrangementsofMixedLineageLeukemiaGeneandItsClinicalSignificanceAbstractTostudytheincidence，thetypesoffusiongenesandtheclinicalsignificanceofrearrangemen

3、tsofmixedlineageleukemia(MLL)geneinacuteleukemia(AL),therearrangementsofMLLgeneof60patientsonfusiongenesresultingfromtherearrangementsofMLLgeneentsofMLLgene,theincidenceofentsofMLLgeneong5BALLpatients,2patientsedtoexpressMLL/ENL,1patientedtoexpressMLL/AF4,theother2patintsdidnotexpressthefusiongenes

4、.ItisconcludedthatFISHisafast,specificandsensitivemethodtodetecttherearrangementsofMLLgeneinALpatientsandnestedRTPCRisaconvenientandfeasiblemethodtodetectthetypesoffusiongenesresultingfromtherearrangementsofMLLgene.ThedetectionofMLLgenerearrangementisofgreatimportanceinpredictingprognosisandguiding

5、therapyinAL.Keyia;mixedlineageleukemiagene;generearrangement；fluorescenceinsituhybridization;nestedRTPCR混合系白血病(mixedlineageleukemia，MLL)基因位于染色体11q23。人类白血病包括初发和治疗相关性白血病,伴有MLL重排。Munoz等［1］报道,MLL重排阳性患者对常规化疗多不敏感，对大剂量化疗或干细胞移植有效，是预后不良的指标。世界卫生组织提出将其单列为11q23/MLL白血病［2］。因此，MLL基因重排的检测对急性白血病（AL）预后判断和治疗方案选择具有重要意

6、义［3］。我们采用FISH技术和巢式RTPCR方法对60例AL患者作了初步研究，探讨MLL基因重排在AL中的发生率、产生融合基因的类型及其临床意义。材料和方法研究对象60例AL患者为我院血液科和深圳市其他医院血液科2003年9月-2005年12月的住院患者，男28例、女32例，年龄3个月-54岁，其中<15岁者17例，≥15岁者43例。所有患者的诊断符合FAB诊断标准。60例AL患者中急性淋巴细胞白血病(ALL)30例（L110例、L215例、L35例）,AML28例（M12例、M25例、M35例、M45例、M58例、M61例、M72例)。混合细胞白血病（AMLL）1例，NK细胞白血病

7、1例。59例为初治患者，1例为难治患者。细胞处理对1例难治性AL患者采集肝素抗凝外周血2ml，其余59例患者均于化疗前采集肝素抗凝骨髓2ml，接种于培养瓶，经直接法或者经24小时培养，按标准方法制备染色体标本，用已制备好染色体标本的细胞悬液2-3滴滴片，自然凉于后用2.8mg／L蛋白酶K室温消化3分钟，室温条件下在2×SSC中洗涤2分钟，并分别于70％、85％、100％的乙醇中梯度脱水2分钟，凉干