急性白血病病人白血病细胞survivin基因的表达及其临床意义论文

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1、急性白血病病人白血病细胞Survivin基因的表达及其临床意义论文【摘要】目的观察Survivin基因在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达,并分析其与预后关系。方法应用RTPCR方法检测62例不同时期AL病人白血病细胞SurvivinmRNA的表达情况，以10例健康人作为对照。结果62例AL病人白血病细胞SurvivinmRNA阳性表达率为72.58%。ALL细胞SurvivinmRNA阳性表达率(76.5%)与ANLL细胞(71.1%)比较差异无显著性，二者均高于正常对照组(χ2=6.01、7.02

2、,P0.05)。初治和复发AL病人白血病细胞SurvivinmRNA阳性表达率分别为78.95%、85.71%，明显高于对照组(χ2=12.77、9.77，P0.05)。白血病细胞SurvivinmRNA表达阴性者接受1个疗程化疗后骨髓缓解率（BMR）为77.78%,明显高于阳性表达者的31.03%（χ2=4.39,P0.05）。结论Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和(或)抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一，Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在

3、靶点。【关键词】Survivin基因白血病聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethecorrelationbeticcellsanditsclinicalsignificance.MethodsSurvivingeneexpressionin62acuteleukemicpatients,and10healthyadultcontrolsiquantiativereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RTPCR)techniq

4、ue.ResultsThepositiveexpressionrateofSurvivingeneinthepatientsalbonemarroalbonemarroarroissionrateofpatientsRNAexpressionotherapy(77.78%vs31.03%)(χ2=4.39,P0.05).ConclusionTheimportantroleofSurvivingeneexpressionintheproliferationanddifferentiationofacuteleu

5、kemiccellsmaybeoneofthereasonsleadingtoinsensitivetochemotherapyofthecells.Survivingenecanbeusedasapotentialtargetfortargetedchemotherapyofthedisease.［KEYNC),MNC比例大于80%,锥虫蓝拒染率大于99%,取约5×106个细胞,PBS洗涤2次,加TrizoL液1mL,混匀后-20℃保存,待提取RNA。1.3总RNA提取按Invitrogen公司试剂盒说明书

6、操作步骤进行。使用紫外分光光度计测定RNA纯度(A260/A2801.6),同时进行RNA定量。1.4cDNA合成取2μgRNA,OLigo(dT)18primer1μL,用DEPC处理水补至12μL,70℃下放置5min。冰上骤冷后,加5×缓冲液4μL,10mmoL/LdNTPs1μL,RNA酶抑制剂20U,37℃5min,MMuLV逆转录酶(BBI公司)20U,反应体系20μL,37℃反应1h,70℃下放置10min,终止反应。1.5PCR扩增Survivin正义链:5′CTTTCTCAAGGACCA

7、CCGCATC3′,反义链:5′CAATCCATGGCAGCCAGCTGC3′,目的基因长度为393bp。βacting正义链:5′CGCTGCGCTGGTCGACA3′,反义链:5′GTCAGGCACGATTTCCCGCT3′,目的基因长度为619bp。反应体系包括:Survivin正、反义链引物各10pmoL,10mmol/LdNTPs0.5μL,10×缓冲液2.5μL,25mmol/LMgCl21.5μL,TaqDNA聚合酶1.0U,RT产物2μL,总体系25μL。预实验确定产物与循

8、环之间呈线性关系。PCR条件:94℃预变性5min；然后94℃变性50ｓ,60℃复性1min,72℃延伸1min,38个循环。同时，行βacting测定作为内参照。1.6PCR产物分析取PCR产物10μL在15g/L琼脂糖凝胶中电泳，85V电泳45～60min。阳性结果可见393bp与619bp处各有一条亮带，分别为Survivin和βacting。用吸光度扫描仪扫描并照相，照片经Metamor