急性白血病病人白血病细胞survivin基因的表

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1、急性白血病病人白血病细胞Survivin基因的表【摘要】目的观察Survivin基因在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达,并分析其与预后关系。方法应用RTPCR方法检测62例不同时期AL病人白血病细胞SurvivinmRNA的表达情况，以10例健康人作为对照。结果62例AL病人白血病细胞SurvivinmRNA阳性表达率为72.58%。ALL细胞SurvivinmRNA阳性表达率(76.5%)与ANLL细胞(71.1%)比较差异无显著性，二者均高于正常对照组(χ2=6.01、7.02,P<0.05)。初治和复发AL病人白血病细胞SurvivinmRNA阳性表达率分别为78.9

2、5%、85.71%，明显高于对照组(χ2=12.77、9.77，P<0.05)。白血病细胞SurvivinmRNA表达阴性者接受1个疗程化疗后骨髓缓解率（BMR）为77.78%,明显高于阳性表达者的31.03%（χ2=4.39,P<0.05）。结论Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和(或)抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一，Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在靶点。【关键词】Survivin基因白血病聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethecorrelationbeticcells

3、anditsclinicalsignificance.MethodsSurvivingeneexpressionin62acuteleukemicpatients,and10healthyadultcontrolsiquantiativereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RTPCR)technique.ResultsThepositiveexpressionrateofSurvivingeneinthepatientsalbonemarroalbonemarroarroissionrateofpatientsRNAexpressio

4、notherapy(77.78%vs31.03%)(χ2=4.39,P<0.05).ConclusionTheimportantroleofSurvivingeneexpressionintheproliferationanddifferentiationofacuteleukemiccellsmaybeoneofthereasonsleadingtoinsensitivetochemotherapyofthecells.Survivingenecanbeusedasapotentialtargetfortargetedchemotherapyofthedisease.［KEYICM

5、分型诊断。62例病人中急性非淋巴细胞白血病（ANLL）45例(M15例,M220例,M312例,M42例,M56例),急性淋巴细胞白血病（ALL）17例(L19例,L28例)。包括初治病人38例,复发病人14例,缓解病人10例。缓解病人中2例系由初诊病人转化而来。所有初诊ALL病人采用VDP(长春新碱、柔红霉素、泼尼松)或VDCP(长春新碱、柔红霉素、环磷酰胺、泼尼松)方案治疗;ANLL病人采用HA(高三尖杉酯碱、阿糖胞苷)或DA(柔红霉素、阿糖胞苷)方案治疗，M3病人采用全反式维甲酸(ATRA)治疗。对照组10例,男6例,女4例,年龄18～55岁,中位年龄39.5岁，均为健康人。1.2标

6、本处理无菌操作取骨髓液2mL,肝素抗凝,FicoLL液(相对密度1.077)分离单个核细胞(MNC),MNC比例大于80%,锥虫蓝拒染率大于99%,取约5×106个细胞,PBS洗涤2次,加TrizoL液1mL,混匀后-20℃保存,待提取RNA。1.3总RNA提取按Invitrogen公司试剂盒说明书操作步骤进行。使用紫外分光光度计测定RNA纯度(A260/A280>1.6),同时进行RNA定量。1.4cDNA合成取2μgRNA,OLigo(dT)18primer1μL,用DEPC处理水补至12μL,70℃下放置5min。冰上骤冷后,加5×缓冲液4μL,10mmoL/LdNTPs1μL

7、,RNA酶抑制剂20U,37℃5min,MMuLV逆转录酶(BBI公司)20U,反应体系20μL,37℃反应1h,70℃下放置10min,终止反应。1.5PCR扩增Survivin正义链:5′CTTTCTCAAGGACCACCGCATC3′,反义链:5′CAATCCATGGCAGCCAGCTGC3′,目的基因长度为393bp。βacting正义链:5′CGCTGCGCTGGTCGACA3′,反义链:5