北京中医药大学马长华高效液相色谱法的建立

《北京中医药大学马长华高效液相色谱法的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实用高效液相色谱法的建立L.R.Snyder,J.J.Kirkland,J.L.GlajchPracticalHPLCmethoddevelopment2nd1997(第一版1988年出版)HPLC技术问世已有30余年,已步入发展与应用的成熟时期,关于方法建立的研究目前已开始逐步趋向稳定。我们相信本书在未来十年或二十年中，理应不会过时并仍有参考价值。实用高效液相色谱法的建立1绪论*9常规样品分离2分离的基础*10计算机辅助方法3检测灵敏度与选择性11生化样品4样品的制备12手性分离5色谱柱*13制备分离6中性样品*14定量7离子样品*15完善方法8梯度洗脱*第一章绪论1-1开始前应知道1-

2、1-1样品的性质所含化合物的数目化合物的结构或官能团化合物的分子量化合物的pKa化合物的uv光谱图化合物的浓度范围样品的溶解度1-1-2分离的目的主要目的是定量分析？共存物（杂质）的检出？未知样品组分的确认？制备性的分离？是否有必要解析出样品中的所有成分？定量分析的准确度和精密度需要多大？方法的普适性？实验室的状况如何？1-2建立分离方法1-2-1选择HPLC分离模式与起始条件假设为一般样品（分子量〈2000）选择HPLC分离模式(图1--3)1-2-2开始方法建立1-2-3改善分离1-2-4可重现的分离1-2-5完善方法主要HPLC方法的特性反相HPLC流动相：水-有机溶剂(A%--B%

3、)色谱柱：C18、C8、苯基、三甲基硅烷、氰基适合的样品能溶于水-有机混合液的大多数样品，尤其是中性或非离子性化合物的首选。主要HPLC方法的特性离子对HPLC流动相：水-有机溶剂，控制PH的缓冲溶液和离子对试剂色谱柱：C18、C8、氰基适合的样品离子或可电离的化合物，尤其是碱或阳离子样品的良好选择。主要HPLC方法的特性正相HPLC流动相：有机溶剂混合液色谱柱：氰基、氨基、二醇基、硅胶适合的样品当反相或离子对HPLC无效是的第二个良好选择；不溶于水-有机混合液的亲脂样品的首选；异构体混合物。1-2-2开始方法建立首次HPLC分离较好的实验条件色谱柱C18、C85μm15×0.46cm流动

4、相水或缓冲溶液-乙氰(80-100%)缓冲溶液25mmol磷酸钾2.03.0添加剂胺改性剂、离子对试剂（开始不用）流速1.5—2.0ml/min温度35—45℃样品量体积<25μL重量<100μg为了避免漏检样品中可能存在的化合物,建议用洗脱能力非常强的流动相,做第一次预实验,然后按照一定速度(20%)降低强溶剂的比例,如例（图1--4）所示.当样品中存在对纯乙氰或纯甲醇强保留的组分时可以考虑用非水反相色谱NARP或者是正相色谱HPLC方法建立的目标（表1--5）