温润养血颗粒治疗肺纤维化的实验研究

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1、温润养血颗粒治疗肺纤维化的实验研究朱际平，孙子凯，朱海青'【关键词】肺纤维化；,,大鼠；,,中药复方；,,实验研究　　摘要：目的：寻找治疗肺纤维化有效的中药复方制剂。方法：将36只SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组和小、中、大剂量组，每组6只。从造模第2天开始给予温润养血颗粒治疗，28d后处死，取左上肺以10%中性福尔马林固定，做HE、VG、MASSON染色，进行病理检查，并以电子计算机图象分析系统进行图象量化分析。结果：病理光镜检查显示，治疗组肺泡炎和肺纤维化程度较模型组轻，治疗组肺间隔面积/视场面积小于模型组(P＜0

2、.05)，治疗组肺间隔灰度/肺泡灰度大于模型组(P＜0.05)。结论：温润养血颗粒可以有效抑制由急性肺损伤引起的肺纤维化，小剂量给药效果最好。　　关键词：肺纤维化；大鼠；中药复方；实验研究　　肺纤维化是多种肺间质疾病的共同结果。主要表现为进行性呼吸困难、干咳等症状，其死亡率较高。目前对其治疗以口服糖皮质激素为主。温润养血颗粒是根据曹世宏教授的临床经验方化裁而成，在临床应用中获得较好疗效。本实验采用博莱霉素引发的肺纤维化大鼠模型为实验对象，以温润养血颗粒治疗28d，将各组大鼠的肺组织做病理切片，利用计算机图象分析系统进行图象分析

3、，评价疗效。　　1材料和方法　　1.1动物清洁级SD雄性大鼠36只，由中国科学院上海实验动物研究所提供，体重210～250g。完全随机分成6个组，分别为：正常组、假手术组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组。动物饲养条件：温度20℃，湿度47%。　　1.2实验药物温润养血颗粒(批号：021029)，由江苏省中医医院制剂部提供。其组成是：人参，蛤蚧，当归，熟地，丹参，川芎等共13味。实验用药为浸膏制剂，浓度以生药计为3.8g/L。实验剂量确定以临床用量(以生药计：24g/kg体重)的4倍为大剂量，2倍为中剂量，临床用量为小剂量

4、，分别为9.6，4.8，2.4g/kg。实验时将浸膏临时配制成相应浓度(0.96，0.48，0.24g/ml)，灌喂量为1ml/100g体重，模型组灌喂相同体积的生理盐水。从造模后第2天开始治疗，1次/d，共28d。博莱霉素(BLM)由日本化学株式会社生产，1.5mg/只，溶于0.3ml生理盐水中。　　1.3肺间质纤维化模型的制作按文献〔1〕的方法进行。实验组动物用乙醚吸入麻醉后，切开颈部皮肤，以血管钳钝性分离暴露气管，用注射器在环状软骨间刺入气管腔，向气管内注射博莱霉素(1.5mg/只溶于0.3ml的生理盐水中)，假手术组动

5、物在相同条件下气管内注射生理盐水0.3ml。注射后立即将大鼠直立并前后旋转。正常组同期饲养，不作任何处理。　　1.4病理学评价方法取大鼠的左上肺以10%中性福尔马林固定，酒精梯度脱水，石蜡包埋，制成5μm的切片，做HE，VG，MASSON染色。　　形态定量分析采用Mias2000图象分析系统(四川大学图象图形研究所)，将切片进行HE，VG染色，将切片置于分析仪显微镜上，在100倍下每例切片自左向右，自上向下选取10个视野，分别测定肺泡间隔面积，视场面积，肺泡间隔灰度，肺泡灰度。测定条件：分辨率800×600，256度灰阶。　　

6、所有数据以±s表示，治疗组与模型组先进行F检验，检验方差齐性。再进行t或t'检验。治疗组间进行方差分析。P＜0.05为有显著性差异。　　2结果　　2.1肺泡间隔面积模型组肺泡间隔面积大于假手术组，有显著差异(P＜0.01)，小中大剂量组肺泡间隔面积及视场的比值均小于模型组，有统计学差异(P＜0.05)。对三个剂量组进行方差分析有显著性差异(P=2.16×105)。另外，假手术组的肺间隔面积，和与视场的比值均大于正常组，且有显著性差异(P＜0.01)。见表1。　　表1各组标本肺泡间隔面积（略）　　#与小剂量组比较；*与正常组比较

7、；・与假手术组的比较；与模型组比较　　2.2肺泡间隔灰度、肺泡间隔灰度与肺泡灰度比值模型组肺泡间隔灰度小于正常组及假手术组，且有显著性差异(P＜0.01)。小剂量组大于模型组，且有显著性差异(P＜0.01)，与正常组比较未见统计学差异(P＜0.05)。中大剂量组与模型组比较有统计学差异(P＜0.05)。小中大剂量组A/B比值行方差分析有显著性差异(P=3.53×109)。见表2。　　表2各组标本肺泡间隔灰度（略）　　#与小剂量组比较；*与正常组比较；・与假手术组的比较；与模型组比较　　3讨论　　肺间质纤维化临床症状的主要特点是

8、进行性的运动性呼吸困难和干咳。现代中医理论认为，肺间质纤维化与“肺痿”“喘证”“咳嗽”相类似，基本可归属于“肺痿”的范畴。其病机与肺肾两虚有关，而肺间质纤维化病理过程中的肺泡壁增厚、渗出物机化、肺泡变形闭锁、间质中的纤维组织收缩、毛细血管数量减少和影响血液循环等表现与“肺痿”