体外消化透析法测定朱砂中汞生物可接受率的实验条件确定

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1、体外消化透析法测定朱砂中汞生物可接受率的实验条件确定作者：庞京团胡广林韩彬齐江宁李平【摘要】目的确定体外消化透析法测定朱砂中汞的生物可接受率的实验条件，建立实验流程，并测定朱砂中汞的生物可接受率。方法模拟胃肠消化环境，研究pH、接触时间等因素对朱砂中汞的溶出率及透析时间等对朱砂中汞的生物可接受率的影响规律，确定合适模拟条件。结果确定的实验流程模拟条件为：液/固比100，人工胃液pH=1.5，加入0.16%胃蛋白酶1ml，接触时间100min，透析时间100min，加入胰液胆盐混合物量为5ml。在确定的实验条件下，CV-AFS测得水飞朱砂中汞的

2、溶出率为2.5×10-6（n=6，RSD＝4.1％），生物可接受率为4.8×10-7(n=6，RSD＝3.5％)。结论体外消化透析法可用于测定朱砂中汞的生物可接受率，可为测定含朱砂中成药中汞的生物可接受率提供方法学上的参考。【关键词】体外消化透析法；朱砂；生物可接受率；汞　　Abstract：ObjectiveTodeterminethesimulatedconditionsforestimatingthebioaccessibilityofmercuryfromcinnabarbymeansofaninvitrodigestionanddi

3、alysis.MethodsInordertodeterminetheappropriatesimulatedconditions,ulatedgastrointestinaldigestionenvironment,andstudiedtheeffectsofcontacttime,thepHofartificialgastricjuice,additionofpepsin,dialysistime,additionofpancreatinbilesaltmixture.ResultsThesimulatedconditionsinedas

4、follolpepsinl,contacttimeof100min,5mlpancreatinbilesaltmixturel,dialysistimeof100min.nO4，0.2%NH4Fe(SO4)，6mol·ml-1NaOH等水溶液待用。　　2.1.3人工肠液取KH2PO46.8g，加水500ml溶解，用0.1mol·L-1NaOH水溶液调节pH值至6.8。　　2.1.4胰液胆盐混合物0.180g胰蛋白酶、1.125g胆盐溶于45ml人工肠液，配制成胰蛋白酶、胆盐质量浓度分别为0.004g·ml-1和0.025g·ml-1的胰液胆盐

5、混合物［7］，现配现用。　　2.2胃消化环境模拟实验准确称取一定量朱砂加入人工胃液，搅拌呈匀浆状，加入胃蛋白酶，（37±1）℃，80r·min-1条件下振荡，一定时间后，离心，取上清液。　　2.3肠吸收环境模拟实验将胃消化环境实验所得样品进行酸度滴定，确定所需要NaHCO3量。将实验中确定NaHCO3水溶液量加入到透析袋中，置透析袋于胃消化实验所得样品中，（37±1）℃，80r·min-1条件下振荡，pH值达到5.0后［9］，向样品中加入胰蛋白酶胆盐混合物，继续振荡，开始计时，一定时间后，收集透析液。　　2.4汞的测定方法所得样品均用高压密封

6、消解-CV-AFS测定汞含量［8］。　　2.5数据处理测定朱砂溶出汞量以及透析汞量，参照　　朱砂中汞溶出率可能还会受到胃蛋白酶量的影响，实验中分别加入0.16g·ml-1胃蛋白酶0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5ml。以加入胃蛋白酶量为横坐标，朱砂中汞溶出率为纵坐标，见图3。在改变加入胃蛋白酶量实验中发现：未加入胃蛋白酶时，朱砂中汞溶出较少，加入蛋白酶后，朱砂中汞溶出率显著增大。加入胃蛋白酶量在1～3.5ml时，朱砂中汞溶出率为（2553±93）ng·g-1，P>0.05，无显著影响，与曾克武［12］报道加入蛋白酶量

7、影响朱砂中汞溶出率不显著相似。因此，实验中加入0.16g·ml-1胃蛋白酶1ml。　　在研究接触时间对朱砂中汞溶出实验中，我们分别测定了15，30，45，60，75，90，105，120min朱砂中汞溶出率。以时间为横坐标，朱砂中汞溶出率为纵坐标，见图4。实验结果表明，朱砂中汞溶出率在0～60min阶段缓慢增大，在60～75min阶段很快增大，在75～90min缓慢增大，90～120min基本不再变化，溶出趋于平衡。对于朱砂的体外消化模拟研究，在保证溶出达到平衡条件下，应尽量减少接触时间。根据实验结果，我们选100min作为胃消化模拟的接触时

8、间。　　图1液/固比对朱砂中汞溶出率的影响（略）　　图2人工胃液pH对朱砂中汞溶出率的影响（略）　　图3胃蛋白酶量对朱砂汞的溶出率的影响（略）　　图4接触时间对朱砂