产esbls、esbls+ampc酶的肺炎克雷伯菌检出及其耐药性分析

产esbls、esbls+ampc酶的肺炎克雷伯菌检出及其耐药性分析

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1、产ESBLs、ESBLs+AmpC酶的肺炎克雷伯菌检出及其耐药性分析卜黎红 徐瑞龙 单小云 许健波 朱以军【关键词】肺炎克雷伯菌近年来,随着β-内酰胺类抗生素,尤其是头孢三代类药物的广泛应用,引起产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)、ESBLs+AmpC酶等一系列耐药菌株的产生,细菌耐药现象日益严重。为更好地了解我院临床分离菌株中产ES-BLs、ESBLs+AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率及耐药性,对138株肺炎克雷伯菌进行ESBLs、ESBLs+Am-pC酶测定及药

2、敏试验,现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1试验菌株138株肺炎克雷伯菌均为我院2003年8月~2004年8月住院及门诊病人感染标本中分离的菌株,根据临床资料去除重复菌株。1.1.2质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603,分别作为产ESBLs阴性和阳性对照菌。1.1.3VITEK-AMS细菌鉴定系统及配套的GNI鉴定卡与GNS-120药敏卡为生物梅里埃公司生产。1.1.4药敏纸片头孢替坦(CTT)、头孢吡肟(FEP)为英国Oxoid产品,亚胺培南(IPM

3、)由默沙东公司提供,头孢哌酮/舒巴坦(SCF)为舒普深公司提供,哌啦西林/他唑巴坦(TZP)等纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。1.1.5药敏用培养基Mueller-Hinton琼脂,英国Oxoid产品。1.2方法1.2.1菌株培养和鉴定细菌分离培养按照《全国临床检验操作规程》进行。用VITEK-AMS专用卡GNI+鉴定。1.2.2ESBLs检测(1)VITEK-AMS测定:采用GNS-120专用药敏卡,严格按说明书操作,仪器自动检查其ESBLs4个检测孔,头孢他啶(CAZ)与头孢他啶/克拉维酸

4、(CAZ/CA),头孢噻肟(CTX)与头孢噻肟/克拉维酸(CAZ/CA)孔的生长浊度≥50%时,判定为ESBLs阳性。(2)双纸片协同试验及确认试验:将阿莫西林/克拉维酸(AMC)纸片置Mueller-Hinton平板中央,依次贴上头孢曲松(CRO)、CAZ、CAZ/CA、ATM、CTX、CTX/CA,其中CRO、CAZ、氨曲南(ATM)、CTX与AMC距离为18mm,CAZ/CA、CTX/CA与AMC距离为25mm,且CAZ/CA、CTX/CA与其它纸片间距离>24mm。(3)双纸片协同试验

5、结果判断:如在AMC纸片与其周围CRO、CAZ、ATM、CTX任一种纸片处出现协同抑菌视为产超广谱β-内酰胺初筛阳性。(4)确认试验:按NCCLs纸片标准,CAZ、CAZ/CA和CTX、CTX/CA2组抗生素纸片任一组中含CA的纸片和不含CA的纸片菌抑菌圈直径相差≥5mm,即为产ESBLs菌株。1.2.3产ESBLs+AmpC酶株的检测(1)表型筛选试验参阅文献〔1,2〕选用IPM、FEP、CAZ/CA、CAZ、CTX/CA、CTX、CTT7种抗生素进行筛选试验。若IPM敏感,而CTT、FEP、CA

6、Z、CAZ/CA、CTX、CTX/CA耐药为产ESBLs+AmpC酶株。(2)扩散协同试验参阅文献〔3,4〕经表型筛选试验为产ESBLs+AmpC酶株作扩散协同试验,每株菌取两平板,一平板将AMC纸片置Mueller-Hinton平板中央,四周依次贴上CAZ、CTX、ATM、CRO;另一平板将AMC纸片置Mueller-Hinton平板中央,在与AMC纸片距离为15mm、20mm、25mm、30mm处各贴FEP。若AMC与CAZ、CTX、ATM、CRO不协同,但与FEP协同为产ESBLs+AmpC酶

7、株。1.2.4药敏试验采用纸片扩散(K-B法),判断标准按NCCLs2002版标准执行。1.2.5统计分处理采用WHO5软件。2结果2.1产ESBLs阳性率及病房分布临床分离株138株,经VITEKGNS-120卡鉴定56株产ESBLs,纸片协同法55株产ESBLs,纸片确认法57株产ESBLs占41.3%(57/138)。各科室产ESBLs株从高到低依次为:神经外科30株,其中28株为NCU病房,2株为普通病房的同一床位,且时间较近。ICU病房8株,婴儿科5株,其余8株来自外科病房,6株来自内科病

8、房。2.2产ESBLs+AmpC酶阳性率  57株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中,2株表型CTT、FEP、CAZ、CAZ/CA、CTX、CTX/CA均耐药,IPM敏感,确定为ESBLs+AmpC酶株,占1.4%(2/138),另外55株产ESBLs肺炎克雷伯菌,有23株CTT纸片抑菌环内存在散在菌落,挑取其散的菌落,经VITEK鉴定为肺炎克雷伯菌,对其进行表型筛选试验,CTT、FEP、CAZ、CAZ/CA、CTX、CTX/CA耐药,IPM敏感。说明其散在菌落为同时产ES

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