产esbls、esbls+ampc酶的肺炎克雷伯菌检出及其耐药性分析

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1、产ESBLs、ESBLs+AmpC酶的肺炎克雷伯菌检出及其耐药性分析作者：卜黎红　徐瑞龙　单小云　许健波　朱以军【关键词】肺炎克雷伯菌近年来，随着β-内酰胺类抗生素，尤其是头孢三代类药物的广泛应用，引起产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）、ESBLs+AmpC酶等一系列耐药菌株的产生，细菌耐药现象日益严重。为更好地了解我院临床分离菌株中产ES-BLs、ESBLs+AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率及耐药性，对138株肺炎克雷伯菌进行ESBLs、ESBLs+Am-pC酶测定及药敏试验，现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料1.

2、1.1试验菌株138株肺炎克雷伯菌均为我院2003年8月～2004年8月住院及门诊病人感染标本中分离的菌株，根据临床资料去除重复菌株。1.1.2质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603，分别作为产ESBLs阴性和阳性对照菌。1.1.3VITEK-AMS细菌鉴定系统及配套的GNI鉴定卡与GNS-120药敏卡为生物梅里埃公司生产。1.1.4药敏纸片头孢替坦（CTT）、头孢吡肟（FEP）为英国Oxoid产品，亚胺培南（IPM）由默沙东公司提供，头孢哌酮/舒巴坦（SCF）为舒普深公司提供，哌啦西林/他唑巴坦（TZP）等纸片购自北京天坛

3、药物生物技术开发公司。1.1.5药敏用培养基Mueller-Hinton琼脂，英国Oxoid产品。1.2方法1.2.1菌株培养和鉴定细菌分离培养按照《全国临床检验操作规程》进行。用VITEK-AMS专用卡GNI+鉴定。1.2.2ESBLs检测（1）VITEK-AMS测定:采用GNS-120专用药敏卡，严格按说明书操作，仪器自动检查其ESBLs4个检测孔，头孢他啶（CAZ）与头孢他啶/克拉维酸（CAZ/CA），头孢噻肟（CTX）与头孢噻肟/克拉维酸（CAZ/CA）孔的生长浊度≥50%时，判定为ESBLs阳性。（2）双纸片协同试验及确认试验:将阿莫西林/克拉维

4、酸（AMC）纸片置Mueller-Hinton平板中央，依次贴上头孢曲松（CRO）、CAZ、CAZ/CA、ATM、CTX、CTX/CA，其中CRO、CAZ、氨曲南（ATM）、CTX与AMC距离为18mm，CAZ/CA、CTX/CA与AMC距离为25mm，且CAZ/CA、CTX/CA与其它纸片间距离>24mm。（3）双纸片协同试验结果判断:如在AMC纸片与其周围CRO、CAZ、ATM、CTX任一种纸片处出现协同抑菌视为产超广谱β-内酰胺初筛阳性。（4）确认试验:按NCCLs纸片标准，CAZ、CAZ/CA和CTX、CTX/CA2组抗生素纸片任一组中含CA

5、的纸片和不含CA的纸片菌抑菌圈直径相差≥5mm，即为产ESBLs菌株。1.2.3产ESBLs+AmpC酶株的检测（1）表型筛选试验参阅2.2产ESBLs+AmpC酶阳性率　　57株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，2株表型CTT、FEP、CAZ、CAZ/CA、CTX、CTX/CA均耐药，IPM敏感，确定为ESBLs+AmpC酶株，占1.4%（2/138），另外55株产ESBLs肺炎克雷伯菌，有23株CTT纸片抑菌环内存在散在菌落，挑取其散的菌落，经VITEK鉴定为肺炎克雷伯菌，对其进行表型筛选试验，CTT、FEP、CAZ、CAZ/CA、CTX、CTX/CA耐药

6、，IPM敏感。说明其散在菌落为同时产ESBLs+AmpC酶株，占16.7%（23/138），25株占18.1%（25/138）。对25株表型为产ESBLs+AmpC酶株进行扩散协同试验:FEP与AMC距离为15mm时，23株发生协同反应;距离为20mm时，17株发生协同反应;距离为25mm时，10株发生协同反应;距离为30mm时，2株发生协同反应。2.3耐药率2.3.1非ESBLs、ESBLs+AmpC酶株、产ESBLs、产ESBLs+AmpC酶的肺炎克雷伯菌的耐药性，见表1。表1非产ESBLs、ESBLs+Ampc酶株，产ESBLs株，产ESBLs+Am

7、pc酶株对16种抗菌药物的药敏结果（略）注:与Ⅰ组比较，*P<0.05;与Ⅱ组比较，△P<0.052.3.223株CTT纸片抑菌环内散在菌落（产ES-BLs+AmpC酶株）与原分离株（产ESBLs）药敏对照:对IPM均敏感，产ESBLs株对环丙沙星（CIP），庆大霉素（GM）、阿米卡星（AK）、复方磺胺甲口恶唑（SXT）敏感的，对应的产ESBLs、ESBLs+Ampc酶株表现为耐药。3讨论超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是一类新的β-内酰胺酶（BLA），属Bush分类中的2be类酶，主要产生于大肠埃希菌和克雷伯菌属，能水解三代头孢如头孢他啶、头

8、孢曲松、头孢噻肟和单环酰胺类氨曲南，并被BLA抑制剂如克拉维酸抑制