成年与老年大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元形态学研究论文

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1、成年与老年大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元形态学研究论文【摘要】目的研究大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元随年龄老化的形态学变化规律，探讨其退行性变的形态学依据。方法SD大鼠16只，雄性，分为成年组(45月龄)和老年组(≥18月龄)。取中脑黑质，常规制片，连续冠状切片，分别进行焦油紫染色和TH免疫组化染色，用图像分析仪分别对Nissl染色细胞、TH免疫组化染色阳性神经元进行计数.freelorphologicalchangesofdopaminergicneuronsinsubstantianigrapactofm

2、idbraininratstoexplorethemorphologicalbasisofthedegenerativeprocess.MethodsSDratsforthepresentstudyonthsandabove18months(n=8each).RoutineparaffinsectionsadeforNisslstaining,.freelmunohistochemicalstainingandelectronmicroscopy.TheneuronsandtheTHpositivecellsin

3、thesubstantianigrapactorphometrictechnique;theultrastructureofTHpositiveneuronsicroscope.ResultsThetotalnumberofneuronsandtheproportionoftheTHpositiveneuronsinthesubstantianigrapacticroscopyshoicreticulumandaccumulatedpigmentformationintheTHpositivecellsofage

4、drat.ConclusionTheremayexistarelationbeteralreductionofdopaminergicneuronsinthesubstantialnigrapactofmidbrain.Keymunohistochemistry;electronmicroscope;tyrosinehydroxylase;rat随着人类平均寿命的增加，神经系统的老化日益受到重视。中脑黑质神经元在多种老年性退行性病变中起着重要作用［1］。多巴胺(dopamine，DA)能神经元是脑内分化最早、表达

5、递质以及发出轴突到靶区的神经元之一，而中脑黑质致密部则是DA能神经元较为集中的区域之一［2-3］。黑质致密部DA能神经元的特异性变性与帕金森病（PD）有着非常密切的关系，其一直是神经科学研究的热点。目前，对老年与成年大鼠黑质致密部内DA能神经元的形态学变化研究得较少。本研究采用Nissl染色、酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase，TH)免疫组织化学染色及电镜等方法对老年和成年大鼠中脑黑质致密部DA能神经元的形态学变化进行研究，探讨DA能神经元在老化过程中的变化规律，以期为研究老年性退行性疾病的发病

6、机制提供一定的形态学依据。1材料和方法1.1实验动物及分组健康SD雄性大白鼠16只，按月龄分为成年组(45月龄，200250g)和老年组(≥18月龄，500600g)，每组8只。实验动物由徐州医学院实验动物中心提供。1.2取材及制片随机取每组中的6只大鼠，戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔麻醉后开胸，从左心插管行4%多聚甲醛灌注固定后取脑，后固定，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋。做黑质区段连续冠状切片，片厚6μm，切片分组收集，分别行Nissl染色、TH免疫组织化学染色。每组中的另2只大鼠用含4%多聚甲醛-0

7、.125%戊二醛的0.1mol/L磷酸缓冲液(PB，pH7.4)灌注固定，灌注毕立即取脑并将其切成冠状中脑厚片，把含有黑质的脑厚片置入4%多聚甲醛-0.125%戊二醛溶液中后固定2h。用0.1mol/LPB(pH7.4)充分漂洗，脑片机200μm切片，保存于PBS中，以备透射电镜样本制作。1.3Nissl染色Nissl染色液由0.1%的焦油紫(Sigma公司)加少许冰醋酸制备而成。用焦油紫染色确定黑质致密部平面，室温下染色10min，95%乙醇快速分色(23s即可)，脱水，透明，封片，镜检。1.4免疫组织化学染色

8、切片脱蜡至水，用3%过氧化氢去除内源性过氧化物酶，微波修复，0.5%正常羊血清封闭，37℃，30min。依次加入：小鼠抗TH抗体(Sigma公司，1∶3000)，生物素结合的羊抗小鼠Ig(Sigma公司，1∶50)，辣根过氧化物酶(HRP)标记的生物素-卵白素复合物(Sigma公司)。以上各步骤之间均用0.01mol/LPBS（pH7.4）冲洗3次，每次5min。最后用D