资源描述：
《troglitazone对小鼠ⅱ型葡萄糖载体和ⅰ型葡萄糖载体mrna表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、Troglitazone对小鼠Ⅱ型葡萄糖载体和Ⅰ型葡萄糖载体mRNA表达的影响论文【摘要】目的探讨Troglitazone对小鼠Ⅱ型葡萄糖载体（mGLUT2）和I型葡萄糖载体（mGLUT1）mRNA表达的影响。方法采用分子克隆技术，将过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)和维甲酸类受体X(RXRα)及mGLUT2和mGLUT1cDNA分别克隆到表达载体pCMX和pGL3b上。PPARγ与RXRα及mGLUT2与mGLUT1克隆载体转染NIH3T3细胞，处理或不处理Troglitazone，应用荧光素酶活性测
2、定法及RNA印迹等方法测定Troglitazone对mGLUT2和mGLUT1重组体荧光素酶活性调节及对mRNA表达的影响。结果Troglitazone可激活mGLUT2和mGLUT1重组体荧光素酶的活性，并且可增加mRNA的表达水平。结论Troglitazone可增强mGLUT2和mGLUT1的表达，可能参与PPARγ对mGLUT2和mGLUT1的调节过程。【关键词】Troglitazone小鼠Ⅰ型葡萄糖载体Ⅱ型葡萄糖载体mRNA表达AbstractObjectiveTounderstandtheposs
3、ibilityoftheeffectofTroglitazoneonmGLUT2andmGLUT1mRNAexpression.MethodsPPARγ,RXRαandmGLUT2andmGLUT1cDNAGLUT2andmGLUT1activityandmRNAexpressioninedbytheTrogiltazonethroughPPARγactivationGLUT2andmGLUT1activityandincreasedthemGLUT2andmGLUT1mRNAexpressionthrou
4、ghPPARγactivation.ConclusionTroglitazoneperhapsbindstotheregulationsonmGLUT2andmGLUT1byPPARγ.KeyGLUT;mRNAexpressionmGLUT2在胰岛、肝脏等组织中表达，mGLUT1在脂肪、肌肉等多种组织中表达，参与各组织吸收葡萄糖的过程。据报道.freelGLUT2和mGLUT1的表达调节，进而参与组织吸收葡萄糖的过程,达到降血糖的目的,本实验利用分子克隆技术构建PPARγ、RXRα和mGLUT2和mGLUT
5、1的表达载体系统，将其转染NIH3T3细胞后处理Troglitazone，通过荧光素酶活性测定和Northernblot等实验方法观察Troglitazone对mGLUT2和mGLUT1的活性调节及对mRNA表达调节。1材料与方法1.1材料NIH3T3细胞株购自ATCC；pCRⅡ-TOPO载体(LifeTechnologies,Gaithersburg,MD,USA)；Dulbecco`smodifiedEagle`s培养液(DMEM,LifeTechnologies,Gaithersburg,MD,USA
6、)；层析柱(Qiagen,Hilden,.freelany)；LipofectAMINEPLUS试剂(LifeTechnologies,Gaithersburg,MD,USA)；OPTI-MENI(LifeTechnologies,Gaithersburg,MD,USA)；裂解缓冲液(Promega,Madison,D，USA)。1.2方法1.2.1重组体的构建mGLUT2启动子的5'侧翼-732碱基区间利用两对引物(上游引物：5'-CATTGCTGGAAGAAGCGTATCAG-3'，下游引物：5'-GG
7、AGACCTTCTGCTCAGTCGACG-3'),mGLUT1启动子的5'侧翼-1227碱基区间利用两对引物(上游引物：5'-GACTGAATTTGTGAA-3'，下游引物：5'-TCGAAGCTCTAGCTGTGC-3'),内参GAPDH(上游引物：5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'，下游引物：5'-GGAGACCTTCTGCTCAGTCGACG-3')用PCR扩增后将扩增片段插入到pCRⅡ-TOPO载体。pCRⅡ-mGLUT2-732用KpnI/BamHI内切酶内切后将片段亚克隆到K
8、pnI/BamHI内切的pGL3b载体,构建重组体pmGT2,pCRⅡ-mGLUT1-1227用KpnI/EcoRI内切酶内切后将片段亚克隆到KpnI/EcoRI内切的pGL3b载体,构建重组体pmGT1。用相同的方法构建重组体pCMX-PPARγ(Pg),pCMX-RXRα(Ra)。利用DNA碱基序列测定法确定重组体的序列。1.2.2瞬间转染方法及荧光素酶活性测定质粒DNA利用层析柱提取纯化。细胞培养直至细胞密
