结核病实验室检查的临床意义

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1、结核分枝杆菌实验室检测方法主要内容一、结核杆菌的病原学基础二、结合分支杆菌全球的流行情况三、结核杆菌的实验室检测方法及临床应用一、结核病的病原学基础结核杆菌属：一类细长略带弯曲，有时呈分枝状的杆菌，本属细菌多具有抗酸性，又称抗酸杆菌（acid-fastbacillus），细菌体内含有分枝菌酸，细胞壁含有大量脂类，这与分枝杆菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相关。本属细菌已经被鉴定的有70多种，可分为三大类：结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌、麻风分枝杆菌；按生长速度可分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养

2、菌三种类型结核分枝杆菌群结核分枝杆菌，是人和动物结核病的病原体，包括人结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）、牛分支杆菌（M.bovis）、非洲分支杆菌（M.africanum）和田鼠分枝杆菌（M.microti），前三种对人类治病，其中人型结核分枝杆菌感染发病率最高。结核分枝杆菌属于缓慢生长分支杆菌及时准确的诊断结核病，有效地控制传染源，对预防结核病至关重要。结核病实验室检查细菌学检查免疫学检查分子生物学检查涂片染色镜检分枝杆菌分离培养分支杆菌药敏试验分枝杆菌菌种鉴定最原始

3、最基础的检测方法涂片染色镜检抗酸染色的原理分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质。包围在肽聚糖的外面，所以分支杆菌一般不易着色，需要经过加热或是延长染色时间来促使其着色。但分支杆菌中的分支菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。涂片染色镜检临床价值适用于多种标本；操作简便，价格低廉。涂片镜检的临床应用一、确诊涂阳结核病及开放性结核2份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性；1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+影像学检查符合活动性肺结核表现。涂片镜检的临床应用二、肺结核治疗评估的主要依据之一治愈：涂阳肺

4、结核患者完成规定疗程，连续2次涂片结果阴性，其中1次是治疗末的涂片。治疗失败：新涂阳患者治疗第5个月末或疗程结束时，痰涂片检查阳性，涂阴肺结核患者治疗过程中任何1次痰菌检查阳性，均为治疗失败。缺点：不能区别结核分枝杆菌和非结核分支杆菌不能区别死菌跟活菌。结核杆菌暴露于异烟肼时，某些条件会失去抗酸性，出现假阴性。检测灵敏度较低（104-105个细菌/毫升）。分枝杆菌分离培养结核菌培养仍是目前诊断结核病的金标准．尤其是药敏试验结果在指导临床用药及耐药性检测等方面具有重要作用,是鉴定是否为活菌的可靠方法．传统

5、的固态培养法需要4～6周才能检测到结核菌的生长．而且阳性率也只有30％-40％；特异性差．各种分枝杆菌均可生长。要确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感性试验。快速培养法:检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2，显微镜直接观察、变色液体培养基等。快速培养法阳性的报告时间大概是1—3周左右，比传统的固态培养法快，但是仪器价格太昂贵。确诊结核病1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性即可确诊。痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核影像学表现+1份痰标本结核分

6、枝杆菌培养阳性结核菌培养临床价值用于耐多药结核疗效判定治愈：（1）患者完成疗程，且在疗程的后12个月，至少最后5次痰培养（每次间隔至少30天）连续阴性。（2）如出现1次痰培养阳性，其后痰培养（间隔至少30天）最少连续3次阴性。失败：治疗的最后12个月，5次痰培养中有两次或两次以上阳性；或者在最后的3次，培养中有任何一次是阳性。分离培养的优点敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条菌/毫升可检出阳性；特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度、色素产生初步判断非结核分枝杆菌；分离出具有活力的纯培养物，为进

7、一步药敏试验提供基础。分离培养的缺点需时长，根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处理方法等影响，操作较直接涂片法复杂，需经严格培训，对实验室要求也是较高。成本是直接涂片法的7-8倍。结核病实验室检查细菌学检查免疫学检查分子生物学检查涂片染色镜检分枝杆菌分离培养分支杆菌药敏试验分枝杆菌菌种鉴定体液免疫学检查细胞免疫学检查体液免疫学检查（血清学检查）结核抗体测定结核抗原测定循环免疫复合物测定血清学诊断血清学诊断技术优势：是一种对疾病进行早期诊断的理

8、想方法。无需活细胞培养和特殊仪器设备操作简便结果显示快速目前用于血清学诊断的主要方法:酶联免疫吸附试验(ELlSA)斑点金免疫渗滤法(DIGFA)免疫印迹法(WesternBlotting)等等2011年WHO正式公告：由于目前的商业血清学试剂在结核检测中存在较大差异，且检测结果很高比例的假阳性和假阴性，因此不建议使用血清学方法作为结核杆菌的诊断实验1。1WHOCommercialSerodiagnosticTestsforDiagnosi