蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳所致肝纤维化的治疗作用研究

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1、蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳所致肝纤维化的治疗作用研究孔维涵，郝洁，方步武，张永进，邢伟，刘洁莹，凌宁生，张玉萍，崔志清【摘要】　　目的探讨蒿鳖养阴软坚方治疗CCl4等所致肝纤维化的作用。方法0.5mlCCl4/100gatetheeffectofHao-bieYangyinRuanjianPrescriptionintreatinghepaticfibrosiscausedbyCCl4.MethodsHepaticfibrosismodelspreparedbysubcutaneouslyinjecting0.5mlCCl4/100gBiyazaki方法〔2〕略加修改：按体重随机区组分组法

2、，随机取8只大鼠为正常对照组(正常组，其中1只换垫料时跑掉)，其余大鼠用于造模。造模第1次四肢皮下注射CCl40.5ml/100g体重，以后每隔3天四肢皮下注射CCl4橄榄油溶液（CCl4∶橄榄油=4∶6,V/V）0.5ml/100g体重，共注射16次，平时以10%乙醇为唯一饮料，但注射前一天临时改为洁净自来水为饮料，注射后再立即改为10%乙醇。造模时不用玉米面、猪油、胆固醇，而用大鼠标准饲料。正常组大鼠不行造模处理。　　2.2分组与给药　　造模45天后，随机取8只造模鼠(短模组)，经肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量测定与肝组织形态学观察证实肝纤维化形成。对其余

3、造模鼠按体重随机区组分组法分为3组：模型对照组(长模组)、蒿鳖养阴软坚方大剂量组、蒿鳖养阴软坚方小剂量组(临床等效剂量组)。造模成功后开始治疗用药：蒿鳖养阴软坚方大、小剂量组分别每天灌胃24.48g/kg和8.16g/kg，体积均为13ml/kg，1次/d，每周用药6d，连续2个月。正常对照组和长模组灌胃等体积蒸馏水。最后1次灌胃结束24h后，大鼠以水合氯醛麻醉，仰卧位剖腹，腹腔静脉取血，分离血清，-20℃保存。取肝组织分别以10%中性甲醛固定及入氯仿∶甲醇(2∶1,V/V)的液体中脱水脱脂。　　2.3指标检测　　2.3.1肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量测定　

4、　采用Jamall法，将Hyp(μg/mg)乘以系数22.38(6000/50×7.46/40)(μg/mg=mg/g，胶原蛋白/肝干粉)。　　2.3.2血清肝纤维化指标检测　　III型胶原(PIIIP)、IV型胶原(IV-C)、透明质酸(HA)采用放射免疫分析法，见试剂盒说明。　　2.3.3肝组织形态学观测　　常规石蜡切片，HE染色和胶原染色，光镜观察。肝纤维化程度分期标准参照文献〔3〕，分为0，1，2，3，4期：无，为0期；汇管区扩大,纤维化，为1期；汇管区周围纤维化,纤维隔形成,小叶结构保留，为2期；纤维隔伴小叶结构紊乱,无肝硬化，为3期；早期肝硬化或肯定的肝硬化，为4期。　　2.

5、4统计分析　　计量资料表示为±s，采用SPSS8.0统计软件，两组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析，其中每两组间比较在方差齐性时用LSD检验而方差不齐时用Tamhane检验。半定量资料采用Ridit分析。　　3结果　　3.1一般情况正常组大鼠生长良好，皮毛柔顺有光泽，活泼好动，饮食正常；模型组大鼠精神差，活动少，皮毛松弛无光泽；治疗组大鼠皮毛少光泽，但精神较好。　　3.2治疗用药对肝组织胶原蛋白含量的影响蒿鳖养阴软坚方8.16g/kg(生药/体重)能明显降低肝组织胶原蛋白。见表1。表1蒿鳖养阴软坚方对CCl4致纤维化大鼠肝胶原蛋白及纤维化程度分期的影响（略）　　3.3对大鼠血清

6、中肝纤维化标志物的影响蒿鳖养阴软坚方8.16g/kg能明显降低血清HA及IV-C水平。见表2。表2蒿鳖养阴软坚方对CCl4致鼠肝纤维化血清标志物的影响（略）　　3.4肝组织病理形态变化镜下观察：正常组大鼠肝组织可见肝板以中央静脉为中心呈条索状向四周放射样排列，板间有不规则肝窦，肝小叶内网状纤维支架结构完整，汇管区无扩大，无纤维组织增生和炎性细胞浸润；肝纤维化模型组大鼠肝小叶结构破坏，纤维组织增生明显，将肝小叶分隔成大小不等的肝细胞团，肝细胞变性坏死，并可见假小叶形成，汇管区扩大，胶原沉积；治疗组肝细胞的变性坏死程度及肝小叶结构破坏程度降低，肝胶原纤维增生亦明显减轻，纤维条索疏松变窄。模型

7、组的肝纤维化程度分期显著高于正常组（P0.01），各治疗组的纤维化程度均有所减降，但未见统计学差异。见表1及图1～4。　　4讨论　　4.1CCl4致大鼠肝纤维化模型形成通过肝组织胶原蛋白含量、血清肝纤维化标志物(HA、IV-C等)和肝组织形态学变化等定量、定性指标判定，本研究所采用的CCl4等可致大鼠肝纤维化模型形成。本文肝组织胶原蛋白含量是通过所测定的Hyp换算出来的，Hyp是组成机体胶原蛋白的一种特有的氨基酸，除外弹性蛋白含少量