蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝损伤的预防作用论文

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1、蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝损伤的预防作用论文赵敏，郭娟，方步武，崔志清【摘要】目的探讨蒿鳖养阴软坚方减轻酒精性肝损伤的作用。方法采用酒精灌胃及高脂饲料、吡唑和羰基铁等建立大鼠酒精性肝病模型，灌胃蒿鳖养阴软坚方预防性治疗。造模10周后检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、丙二醛(MDA)、肝组织胶原蛋白含量和基质金属蛋白酶-2,-9(matrixmetalloproteinases2,9;MMP-2,MMP-9)，光镜观察肝组织病理变化。结果与模型对照组比较，蒿鳖养阴软坚方高、低剂量组死亡率、ALT、AS

2、T、GLOB、MDA、胶原蛋白、MMP-2及MMP-9的水平显著降低(P0.05)，白蛋白含量显著升高(P0.05)。同时模型对照组大鼠肝组织出现点、灶状坏死、大量脂滴、炎细胞浸润.freela公司产品。1.3造模原料吡唑为Fluca公司产品，羰基铁粉(YTF-0，基础粉)由岳龙超细金属材料有限公司提供，衡水老白干(酒精体积分数为65%)由衡水安平人和酒业生产。大鼠基础饲料(面料)由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，金龙鱼玉米油为嘉里粮油(天津)有限公司产品，猪油购自市场。自制高脂饲料含大鼠基础饲料80%、猪油4%、玉米油16%和羰基铁0.125%，均为质量分数。1.4

3、试剂丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒由江苏碧云天生物技术研究所提供。2方法2.1造模造模大鼠8:00灌胃白酒，1次/d，酒精浓度逐渐增加，依次为10%，20%，30%，40%，50%，60%，每个浓度灌胃2d，最后增至65%并维持该浓度再灌胃8周，该维持剂量相当于6.2g·kg-1·d-1，体积均为1.2ml·(100g)-1·d-1，并用吡唑25mg·kg-1·d-1溶于酒内灌胃。期间，造模大鼠饮用10%酒，食用高脂饲料。正常对照大鼠每日同时灌胃蒸馏水

4、，以自来水和大鼠标准饲料喂养。2.2分组用药实验分2批进行，每批随机取4只大鼠为正常对照组(正常组，共8只)，其余均用于造模。当灌酒浓度增加到65%时，对造模大鼠按体重随机区组法分组为模型对照组(模型组，32只)、蒿鳖养阴软坚方高、低剂量组(各20只)、阳性对照药秋水仙碱组(20只)。同时进行预防性用药，每天一次于傍晚灌胃治疗药物，分别以蒿鳖养阴软坚方和秋水仙碱的临床等效剂量，按公式dB=dA×(RB/RA)×(MP-2、MMP-9检测用明胶酶谱法3：取-80℃冻存的肝组织50mg，以PBS冰浴匀浆，12000r/min30min离心抽提蛋白;用考马斯亮蓝G-250法进行蛋白

5、定量;配制SDS-PAGE胶(已加入底物明胶)，以每孔50μg蛋白量上样，进行电泳;电泳结束后，凝胶经洗脱、孵育、考马斯亮蓝染色、脱色至显示出MMP-2和MMP-9为位于蓝色背景上的透亮条带;经标准蛋白对照，为酶原型MMP;以凝胶成像仪扫描，用分析软件测定酶分解条带的亮度和面积。③肝组织用10%中性缓冲甲醛液固定，石蜡包埋，常规切片，HE染色，光镜观察肝脏病理改变。病理分级标准参照文献4：1级：脂肪变30%，局灶性气球样变，少数小坏死灶;2级：脂肪变30%，气球样变，多数小坏死灶，Mallory小体形成，局部中性粒细胞浸润;3级：脂肪变50%，坏死灶融合或形成桥接坏死，伴明显

6、的Mallory小体形成;4级：脂肪变75%，损伤广泛。④血清脂质过氧化物(MDA)用荧光分光光度法检测5;血清ALT、AST、ALB、TP按试剂盒的方法测定，球蛋白(GLOB)=TP-ALB。2.4统计分析SPSS11.5软件。计量资料用±s表示，采用单因素方差分析;等级资料多组间比较用Kruskal-ann-DA含量模型组大鼠肝组织胶原蛋白和血清MDA含量较正常组显著升高(P0.01);治疗组肝组织胶原蛋白和血清MDA含量较模型组显著降低(P0.01);各个治疗组之间胶原蛋白和血清MDA含量无显著差异。见表2。3.4大鼠血清ALT、AST、ALB、GLOB含量模型组大鼠血

7、清ALT、AST和GLOB含量较正常组显著升高(P0.01)，治疗组血清ALT、AST和GLOB含量较模型组显著降低(P0.01);模型组大鼠血清ALB含量较正常组显著降低(P0.01)，治疗组血清ALB含量较模型组显著升高(P0.01);各个治疗组之间ALT、AST、ALB、GLOB含量无显著差异。见表3。3.5大鼠肝组织MMP-2、MMP-9水平电泳胶上显示的透亮条带是酶原型MMP-2和MMP-9活化之后对明胶的水解条带(图7)。模型组大鼠肝组织MMP-2和MMP-9水解条带的亮度和面积较正常组显著