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1、食管癌组织中S期激酶相关蛋白2mRNA的表达意义孙永刚，彭贵勇，肖天利，唐郡，李向红，罗元辉，廖化禹【关键词】食管肿瘤SignificanceofSphasekinaseassociatedprotein2mRNAexpressioninesophagealcarcinoma 【Abstract】AIM:ToexploretheSphasekinaseassociatedprotein2mRNAexpressionanditsrelationshipRNAinesophagealcarcinomatissue
2、sanditscorrespondingadjacenttissuesRNAexpressioninesophagealcarcinomaRNAa,butnotcorrelatedorsize,andlymphnodemetastasis.CONCLUSION:IncreasedSkp2mRNAexpressioncontributestothecarcinogenesisandprogressofesophagealcarcinoma,ayprovidesomenea. 【Keyerasechainreac
3、tion;esophagealneoplasms 【摘要】目的：探讨S期激酶相关蛋白2mRNA在食管癌及其癌旁组织中的表达及其与食管癌临床病理特征的关系.方法：采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测S期激酶相关蛋白2mRNA在45例手术切除的食管癌组织及癌旁组织中的表达.结果：S期激酶相关蛋白2mRNA表达率在食管癌中为66.6%(30/45),而癌旁组织中为24.4%(11/45),差异有显著性(P0.05).S期激酶相关蛋白2mRNA阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分
4、化程度及TNM分期有关(P0.05).结论:S期激酶相关蛋白2的高水平表达促进了食管癌的发生发展.并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段. 【关键词】S期激酶相关蛋白质类;逆转录聚合酶链反应；食管肿瘤 0引言 我国是食管癌高发区,在我国居恶性肿瘤的第四位〔1〕.Skp2(Sphasekinaseassociatedprotein2)是新发现的SCF（Skp1CullinFbox)多功能E3酶复合体中的一种Fbox蛋白，参与细胞增殖与调亡的调控，与肿瘤的发生发展有着密切的关系.我们利用RTPCR法检测
5、中手术切除的食管癌标本S期激酶相关蛋白2mRNA表达,探讨其与食管癌临床病理参数之间的关系. 1材料和方法 1.1材料 45例食管癌来自第三军医大学第一附属医院(2004～2005)手术标本，由西南医院病理科经病理证实为食管癌，全部病例术前均未作化疗、放疗;其中男28例,女17例.年龄25～70（平均50.2）岁.取癌组织及手术切缘组织,放入经二乙基焦碳酸酯(DEPC)处理过的Ep管内,置-70℃低温冰箱保存备用.TriPure分离试剂(Roche);RTPCR试剂盒(博大泰克公司);S期激酶相关蛋白2引
6、物及βactin引物(上海生工合成);PCRmarkerⅠ(北京天为时代).紫外分光光度计(DU640型,美国),PCR扩增仪(2700型,PE公司,美国).ZF90型多功能暗箱式紫外透射仪(上海顾村电光仪器厂),凝胶成像仪(BioRad公司,美国). 1.2方法 采用TriPure一步法提取组织总RNA,操作方法按试剂说明进行.将提取的总RNA用DEPC处理过的去离子水重悬RNA颗粒,紫外分光光度计(BioRad)下进行核酸定量.RTPCR检测食管癌及癌旁组织中S期激酶相关蛋白2mRNA的表达采用两步法试
7、剂盒(博大泰克公司).S期激酶相关蛋白2与βactin引物序列根据电脑软件Primer5.0版设计,其上游序列:5＇ACCTTTCTGGGTGTTCTGGATT3＇;下游序列:5＇GATAGGTGTTGGAGGTAGTTGAGC3＇.PCR产物片段为316bp.以βactin为内参照,其上游引物序列:5＇GAAACTACCTTCAACTCCATC3＇;下游引物序列:5＇CATCTCTTGCTCGAAGTC3＇.PCR产物片段为502bp.RTPCR的操作步骤参照试剂盒说明进行.先将以上所提取的总RNA反转录成c
8、DNA.PCR扩增反应:取2μL反转录cDNAPCR扩增,反应体积为50μL,并按以下参数在PCR扩增仪(2700型,PE公司,美国)上进行:94℃预变性5min,94℃变性50s,53℃退火50s,72℃延伸2min,40个循环;72℃最终延伸8min,4℃贮存备用.取5μLPCR产物经20g/L琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色后,紫外透射仪下观察结果,并在凝胶成像仪上照相.以PCRMa
