自体外周血单个核细胞对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖对其干预作用

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1、自体外周血单个核细胞对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖对其干预作用作者：苗艳艳黄兆胜危建安吴立蓉【摘要】目的观察、探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖AP11的干预作用。方法以手术切除肝癌组织为标本，胰酶短暂消化加吹打、单细胞悬液培养法原代培养肝癌细胞。通过倒置显微镜观察其形态学特征。于分离培养第2天，加芦荟多糖AP11、芦荟多糖AP11干预及未干预的PBMC于癌细胞中，倒置显微镜观察其对癌细胞形态的影响，MTT法观察其对癌细胞生长的影响。结果采用胰酶短暂消化加吹打分离、单细

2、胞悬液原代培养的方法，可成功获取原代肝癌细胞;与空白对照组相比，芦荟多糖组癌细胞在形态上无明显差别，MTT实验结果表明其对癌细胞的生长无明显影响;与空白对照组相比，芦荟多糖AP11干预与未干预PBMC组癌细胞形态均有较大变化，MTT实验结果表明，其对癌细胞的生长有显著抑制作用。结论芦荟多糖AP11无直接体外抗肿瘤活性，其抗肿瘤活性可能是通过与PBMC的相互作用，通过调节机体的免疫系统而达到的。【关键词】外周血单个核细胞;原代肝癌细胞;细胞模型;芦荟多糖;抗肿瘤活性　　Abstract:ObjectiveToo

3、bservetheeffectofPBMConhomebodyprimaryhepatomacellsandtheinterventionofAloeverapolysaccharide.MethodsCandPBMCdealtaryculturehepatomacellsaftertacellmorphologyacellgroeasuredbyMTTassay.ResultsPrimaryculturehepatomacellshepatomatissuebyusingthemethodofpancrea

4、ticenzymetransientdigestion,simultaneousbloonocellularsuspension.paredaryculturehepatomacells,butthePBMCandinterferedPBMCgrouphadsignificanteffectonprimaryculturehepatomacells.Somecellsbecamefusiformfrompolygon,andsomebecameshrinking,darkandround.MTTassayin

5、dicatedthat,paredaryculturehepatomacells(P>0.05),butPBMCandinterferedPBMCsignificantlyinhibitedthehepatomacellgroaybecontributetotheinteractionmunologicsystem.　　Keyononuclearcell(PBMC);Primaryhepaticcarcinomacell;Cellmodel;Aloeverapolysaccharide;Antineop

6、lasticactivity　　目前，肿瘤细胞株常作为体外筛选具有抗肿瘤药理活性药物的实验模型。但由于体外培养时间长、传代次数过多，肿瘤细胞的生物学特性不免发生了某些变化，不能更真实地反映体内肿瘤细胞的生长特性。而利用患者外周血中的单核细胞进行体外培养、扩增，然后回输体内，激活患者的免疫系统，进而杀灭、限制肿瘤细胞的方法，近年来在临床上有了一定应用，并取得了较好效果。本研究原代培养了自体外周血单个核细胞(PBMC)及肝脏肿瘤组织癌细胞(PHCC)，观察了自体PBMC对PHCC生长、形态的影响及芦荟多糖的干预作

7、用。以原代细胞为模型，初步验证了芦荟多糖及其干预的PBMC对HepG2生长及形态的影响。　　1材料与仪器　　1.1药物与试剂芦荟多糖AP11，由本实验室提取;Hank’s液、培养基RPMI1640、胰蛋白酶、台盼蓝，均由广州威佳科技有限公司提供;胎牛血清，Gibico公司提供;四唑氮蓝、二甲基亚砜，由美国Sigma公司提供;人淋巴细胞分离液(LTS1077)，天津灏洋生物制品科技有限责任公司提供。　　1.2仪器YXQ-LS-505II立氏压力灭菌器，上海博讯实业有限公司生产;YHG-X远外快捷恒温干燥箱、H.

8、H.S11-2型电热恒温水浴锅，上海医疗器械厂生产;TDL-40B台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产;ST-2B型倒置显微镜，日本Olymplus公司生产;L11Nikon数码照像机，日本尼康公司生产。　　1.3其它人体新鲜外周静脉血、肝癌组织，由肝癌患者提供(原发性肝细胞肝癌，分化较差，临床分期Ⅱ期)。　　2方法　　2.1人PBMC分离制备在肝癌患者手术前3天采取其外周静脉血6ml，以人淋巴细胞分