钙离子在p物质促胃癌细胞增殖过程中的作用论文

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1、钙离子在P物质促胃癌细胞增殖过程中的作用论文【摘要】目的:研究P物质（SP）对体外培养的人低分化胃癌细胞系MKN45增殖的调节作用,探讨钙信号在其中的作用.方法:以第4代人胃癌细胞系MKN45为研究对象,用MTT方法观察了不同浓度的SP，ASN1377642（NK1受体拮抗剂）、新霉素（PIP2拮抗剂）、尼卡地平(钙通道阻断剂）对MKN45增殖的影响.结果:对于体外培养的人低分化胃癌细胞系，不同浓度的SP(10,50,100nmol/L)可以显著的刺激MKN45的增殖，其增殖率分别为57.23%，63.75%，52.95%（P0.05）.不同浓度的ASN1377642、尼卡地平和新霉素

2、与MKN45预先孵育后SP促MKN45的增殖率显著降低（P0.05），但是增加上述药物剂量其抑制效应并无显著增加（P0.05）.结论:SP可通过与NK1结合有效促进胃癌细胞增殖.ASN1377642,尼卡地平和新霉素可以显著的抑制SP的促增殖效应，Ca2+可能在该过程中起重要作用.【关键词】P物质胃肿瘤细胞增殖0引言感觉神经肽P物质（substanceP,SP）是主要的速激肽之一.freela公司）；小牛血清（Sigma）；RPMI1640培养基（Gibco公司）；CO2孵箱(日本池本理化工业株式会社)，酶联检测仪(美国BioRad550型).1.2方法1.2.1细胞培养将人胃癌MKN

3、45细胞培养于含100mL/L小牛血清的RPMI1640培养基中，添加青霉素及链霉素等.于37℃，50mL/LCO2的条件下常规培养.取指数生长期2×107/L细胞传代及接种于96孔板中，同时加入处理药物，培养48h.1.2.2实验处理及分组将2×107/L细胞接种于96孔板，每组8个复孔.实验组分组如下：①分别以10，50,100nmol/LSP与MKN45细胞供孵育48h；②分别以50，250，500nmol/LASN1377642预先与MKN45细胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h；③分别以1×10-7，1×10-6，1×10-5mol/L尼卡地平预先与MKN45细

4、胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h；④分别以1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L新霉素预先与MKN45细胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h.同时设立空白对照组.1.2.3细胞增殖实验经各组药物处理后的细胞，弃上清，每孔加入200μL新配制的5g/LMTT，37℃继续孵育4h，弃上清加入150μL的二甲基亚砜（DMSO），混匀后用酶标仪在490nm波长测定吸光度（A）.肿瘤细胞增殖率=（实验孔测定值/对照孔测定值-1）×100%.统计学处理：用SPSS13.0统计软件，所有计量资料以x±s表示，统计分析方法采用LSDt检验，以P0.05作为具

5、有显著性差异.2结果2.1不同浓度的SP促胃癌细胞增殖作用10，50,100nmol/LSP具有明显的促胃癌细胞MKN45增殖的作用.3种不同浓度的SP促胃癌细胞的增殖率分别为：57.23%，63.75%，52.95%（P0.05）.随着SP浓度的增加，SP促胃癌细胞增殖率并不显著增加，在100nmol/L浓度时，细胞增殖率反有下降趋势（图1）.2.2不同浓度的ASN1377642对SP促胃癌细胞增殖效应的影响用ASN1377642与MKN45预先孵育后能显著抑制SP的促胃癌细胞增殖效应.50，250，500nmol/LASN1377642预先孵育后细胞的增殖率分别为24.54%，14

6、.64%，14.23%（P0.05）.随着ASN1377642浓度的增加，其抑制效应没有显著的增加（P0.05，图2）.2.3不同浓度的尼卡地平对SP促胃癌细胞增殖效应的影响尼卡地平与MKN45预先孵育后能显著抑制SP的促胃癌细胞增殖效应.1×10-7，1×10-6，1×10-5mol/L尼卡地平预先与MKN45细胞供孵育后细胞的增殖率分别为21.88%，19.58%，19.38%（P0.05）.随着尼卡地平浓度的增加，其抑制效应无显著增加（P0.05，图3）.2.4不同浓度的新霉素对SP促胃癌细胞增殖效应的影响新霉素与MKN45预先孵育后能显著的抑制SP的促胃癌细胞增殖效应.1×10-7

7、,1×10-6,1×10-5mol/L新霉素预先与MKN45细胞供孵育后细胞的增殖率分别为16.73%，14.42%，14.23%（P0.05）.随着新霉素浓度的增加，其抑制效应无显著增加（P0.05，图4）.3讨论感觉神经肽是广泛存在于中枢和外周神经中的一类神经递质，包括SP,.freelol/L时其增殖率反而有所下降的机制还不清楚.我们用不同浓度的NK1受体拮抗剂ASN1377642预先与MKN45孵