钙离子在p物质促胃癌细胞增殖过程中的作用

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1、钙离子在P物质促胃癌细胞增殖过程中的作用【摘要】目的:研究P物质（SP）对体外培养的人低分化胃癌细胞系MKN45增殖的调节作用,探讨钙信号在其中的作用.方法:以第4代人胃癌细胞系MKN45为研究对象,用MTT方法观察了不同浓度的SP，ASN1377642（NK1受体拮抗剂）、新霉素（PIP2拮抗剂）、尼卡地平(钙通道阻断剂）对MKN45增殖的影响.结果:对于体外培养的人低分化胃癌细胞系，不同浓度的SP(10,50,100nmol/L)可以显著的刺激MKN45的增殖，其增殖率分别为57.23%，63.75%，52.95%（P<0.05）.不同浓度的ASN137764

2、2、尼卡地平和新霉素与MKN45预先孵育后SP促MKN45的增殖率显著降低（P<0.05），但是增加上述药物剂量其抑制效应并无显著增加（P>0.05）.结论:SP可通过与NK1结合有效促进胃癌细胞增殖.ASN1377642,尼卡地平和新霉素可以显著的抑制SP的促增殖效应，Ca2+可能在该过程中起重要作用.【关键词】P物质胃肿瘤细胞增殖0引言感觉神经肽P物质（substanceP,SP）是主要的速激肽之一，广泛分布于包括神经系统在内的各组织中，SP除具有神经递质和炎性介质的作用外，对多种细胞还具有促有丝分裂活性.研究［1-2］表明SP对多种细胞有促有丝分裂活性，

3、促进细胞的增殖，其中包括平滑肌细胞、上皮细胞以及一些神经源性的肿瘤细胞等.SP通常是与G蛋白结合型受体结合后发挥生物学作用的，其中NK1受体是最重要的受体亚型，SP与NK1受体结合可激活细胞肌醇磷脂的水解、细胞内Ca2+升高、cAMP水平增高以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）［3-4］，从而启动细胞内一系列信号事件，激动相应的第二信使而启动多个代谢途径.然而SP与胃癌细胞增殖的确切关系目前尚未阐明.本研究旨在观察SP对体外培养的人胃癌细胞是否有促增殖作用以及钙信号在其中的作用.为胃癌的临床综合治疗提供新的实验和理论基础.1材料和方法1.1材料人胃低分化腺癌细胞系MKN45

4、（第四军医大学实验动物中心）；SP（瑞士ALEXIS公司）；ASN1377642（德国Merck公司）；尼卡地平和新霉素（第四军医大学药理学教研室）；噻唑蓝(MTT)（美国Sigma公司）；小牛血清（Sigma）；RPMI1640培养基（Gibco公司）；CO2孵箱(日本池本理化工业株式会社)，酶联检测仪(美国BioRad550型).1.2方法1.2.1细胞培养将人胃癌MKN45细胞培养于含100mL/L小牛血清的RPMI1640培养基中，添加青霉素及链霉素等.于37℃，50mL/LCO2的条件下常规培养.取指数生长期2×107/L细胞传代及接种于96孔板中，同时加入处理

5、药物，培养48h.1.2.2实验处理及分组将2×107/L细胞接种于96孔板，每组8个复孔.实验组分组如下：①分别以10，50,100nmol/LSP与MKN45细胞供孵育48h；②分别以50，250，500nmol/LASN1377642预先与MKN45细胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h；③分别以1×10-7，1×10-6，1×10-5mol/L尼卡地平预先与MKN45细胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h；④分别以1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L新霉素预先与MKN45细胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育4

6、8h.同时设立空白对照组.1.2.3细胞增殖实验经各组药物处理后的细胞，弃上清，每孔加入200μL新配制的5g/LMTT，37℃继续孵育4h，弃上清加入150μL的二甲基亚砜（DMSO），混匀后用酶标仪在490nm波长测定吸光度（A）.肿瘤细胞增殖率=（实验孔测定值/对照孔测定值-1）×100%.统计学处理：用SPSS13.0统计软件，所有计量资料以x±s表示，统计分析方法采用LSDt检验，以P<0.05作为具有显著性差异.2结果2.1不同浓度的SP促胃癌细胞增殖作用10，50,100nmol/LSP具有明显的促胃癌细胞MKN45增殖的作用.3种不同浓度的SP促胃癌细

7、胞的增殖率分别为：57.23%，63.75%，52.95%（P<0.05）.随着SP浓度的增加，SP促胃癌细胞增殖率并不显著增加，在100nmol/L浓度时，细胞增殖率反有下降趋势（图1）.2.2不同浓度的ASN1377642对SP促胃癌细胞增殖效应的影响用ASN1377642与MKN45预先孵育后能显著抑制SP的促胃癌细胞增殖效应.50，250，500nmol/LASN1377642预先孵育后细胞的增殖率分别为24.54%，14.64%，14.23%（P<0.05）.随着ASN13