钙离子在P物质促胃癌细胞增殖过程中作用的研究

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1、第四军医大学硕士学位论文钙离子在P物质促胃癌细胞增殖过程中作用的研究姓名：丰帆申请学位级别：硕士专业：外科学（普通外科）指导教师：王为忠20070501独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：保护知识产权声明

2、本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学硕士学位论文钙离子在P物质促胃癌细胞增殖过程中作用的研究研究生：丰帆导师：王为忠教授（主任医师）辅导老师：张洪伟副教授第四军医大学西京医院胃肠外科，西安710032中文摘要【背景

3、】感觉神经肽P物质(substanceP，SP)是主要的速激肽之一，广泛分布于包括神经系统在内的各组织中，SP除具有神经递质和炎性介质的作用外，对多种细胞还具有促有丝分裂活性。近年来大量的实验研究证明SP对多种细胞有促有丝分裂活性，促进细胞的增殖，其中包括平滑肌细胞、上皮细胞以及一些神经源性的肿瘤细胞等。前期实验发现人的胃癌组织内分布着较正常胃组织更多的P物质免疫阳性神经纤维。它们的分布特征表明其是由于胃癌组织的存在而诱发再生的神经纤维。该结果表明胃癌组织内分布的肽能神经纤维可能直接促进胃癌细胞增殖。SP是通过与速激肽的受体（NK）结合后发挥其生理作用的。SP与NK-1受体结

4、合可激活引起细胞肌醇磷脂的水解，2+细胞内Ca升高，cAMP水平增高以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的活化，从而启动细胞内一系列信号事件，激动相应的第二信使来启动多个代谢途径。最终导致细胞的增殖。【目的】研究胃癌细胞系MKN45表面NK-1受体的表达，SP及拮抗剂（NK-1受体拮抗剂、尼卡地平和新霉素）对体外培养的人胃癌细胞的增殖的3第四军医大学硕士学位论文调节作用，探讨钙信号在其中的作用。【方法】以第四代人胃癌细胞系MKN45为研究对象，以不同浓度的SP刺激，观察其对细胞增殖的影响，又分别以ASN-1377642（NK-1受体拮抗剂）、新霉素（PIP2拮抗剂）和尼卡地平(

5、钙通道阻断剂）为干预因素，观察它们对P物质作用的影响，并用激光共聚焦扫描显微镜观察在该过程中钙离子浓度的变化。【结果】SP在10nmol/L～100nmol/L范围内对人胃癌细胞呈剂量依赖性-6增生刺激。ASN-1377642(NK-1受体拮抗剂)、新霉素(10mol/L)和尼卡地平-6(10mol/L)均可以明显的抑制SP的促增殖作用，增加剂量抑制率不再增加。在Hanks液中，SP可以显著升高细胞内游离钙离子浓度，ASN-1377642和尼卡地平可以显著的抑制这一效应，在D-Hanks液中，SP同样可以增加细胞内游离钙离子浓度，但是幅度较在Hanks液中有显著性降低。【结论

6、】1、胃癌细胞系MKN45表达速激肽受体NK-1。2、SP通过与受体NK-1结合对胃癌细胞系MKN45有促增殖作用。3、SP与受体NK-1结合后引起细胞内游离钙离子浓度的升高。4、SP导致的细胞内游离钙离子浓度的升高主要通过细胞外钙离子内流和钙库钙离子释放。5、MKN45游离钙离子浓度的升高在SP促增值效应中起了重要的作用。6、钙离子通道阻断剂及PIP2拮抗剂可抑制由SP诱发的胃癌细胞增殖。7、NK-1拮抗剂、钙离子通道阻断剂及PIP2拮抗剂具有潜在的抗癌活性。【关键词】钙；P物质；胃癌细胞；细胞增殖；激光共聚焦扫描显微镜4第四军医大学硕士学位论文Roleofcalciumo

7、ntheproliferativeeffectofsubstancePongastriccancercellsCandidateformaster:FengFanSupervisor:Prof.WangWeizhongAssistantTutor:Prof.ZhangHongweiDepartmentofGastrointestinalSurgery,XijingHospitalFourthMilitaryMedicalUniversityXi’an710032,ChinaAbstract【Backgr