反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量论文

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1、反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量论文【摘要】目的:建立反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮的含量的方法。方法:在ODS-C18色谱柱上采用流动相乙睛-0.025mol/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)溶液进行梯度洗脱：乙腈：0～5min，70%;5～30min，70%→90%；30～50min，90%。检测波长213nm，流速1.0ml/min。结果:在0.3～7μg范围内，莪术醇对照品的峰面积（Y）与其浓度（X）呈现良好的线性关系，r

2、=0.9996，在0.3～7μg范围内.freelericOil)是从姜科植物蓬莪术(CurcumaphaeocaulisValeton)、广西莪术(Curcuntakastation色谱工作站；AL204型电子分析天平（梅特勒-托利多公司生产）；18B-C型高速离心机（上海安亭科学仪器厂生产）。1.2试剂及药品乙腈（HPLC级），天津四友生物医学技术有限公司生产；甲醇(HPLC级），天津四友生物医学技术有限公司生产；吉马酮（分子量：206.32，中国药品生物制品检定所提供，批号：（111665-20

3、0401）；莪术醇(分子量：236.34,中国药品生物制品检定所，批号：100185-200405）；莪术油试样品（瑞安天瑞）；莪术油凝胶剂（本院自制，批号为：0603051，0603062，0603093）；其他制剂均为分析纯。1.3色谱条件色谱柱：25cm×4.6mm，5μm，HypersilODSC18反相色谱柱，流动相：乙睛-0.025mo1/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)梯度洗脱：乙腈：0～5min，70%；5～30min，70%→90%；30～50min，90%，柱温：25

4、℃，流速：1.0ml/min，检测波长：213nm，进样量20μl。2方法和结果2.1系统适应性试验在1.3的色谱测定条件下，莪术醇与吉马酮峰形对称，保留时间分别约为20min和26min，理论塔板数3000，分离度大于4，记录色谱图，结果见图2。2.2最低检出量测定调整检测灵敏度及进样量，测定峰高为基线噪声3倍时的进样量，作为检出限，按该方法测得的最低检测限为10ng·ml-1，最低检测量为0.2ng。2.3标准曲线的制备精密称取莪术醇对照品10mg、吉马酮对照品10mg分别置10ml容量瓶中，用乙

5、腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。另取莪术醇对照品溶液和吉马酮对照品溶液各5ml于25ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得对照品混合溶液。精密量取对照品混合溶液2、3、4、6、10、15、18ml，分别置25ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，分别精密注入20μl，记录峰面积，以峰面积对浓度进行回归分析，得莪术醇回归方程为：Y=12765.7035X-34.1235(r=0.9996)，线性范围为0.3～7μg，吉马酮回归方程为：Y=63881.3685X+28.1730(r=0.9997)，线

6、性范围为0.3～7μg。2.4回收率试验在葡萄糖注射液中加入莪术醇对照品、吉马酮对照品各适量，按上述色谱条件进样(20μl)，计算莪术醇和吉马酮的回收率，结果见表1、表2。2.5精密度试验取对照品混合溶液，在上述色谱条件下，连续进样5针(20μl)，以峰面积计算精密度，结果莪术醇和吉马酮的RSD分别为1.81%和0.7%。2.6样品含量测定取不同批次莪术油凝胶1.0ml，置100ml容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，取一定量置于5ml离心管中，以4000r/min转速离心5min，取上清液20μl进

7、样，记录峰面积，代入回归方程计算，结果批号为0603051、0603062、0603093的样品含量分别为标示量的99.91%，100.10%，99.42%，结果见表3。3.1分析方法的选择莪术油的主要有效成分为莪术醇，但莪术醇的相对含量很小，而其他组分如吉马酮等的含量相对很高，因此，以选择吉马酮为含量测定目标成分，同时测定莪术醇的含量4。取吉马酮对照品，加入乙腈溶解并稀释制成5μg/ml的溶液，在UV-7502PC型紫外可见分光光度计上190～400nm处进行扫描，莪术醇和吉马酮对照品的最大吸收波长

8、分别在205nm和213nm，故以213nm作为液相色谱检测波长。若采用UV方法测定凝胶剂中的吉马酮含量会有较大的误差，故本研究选择了专属性较高的HPLC法。3.2流动相组成的优化参照各类文献5，选用优化后流动相：乙腈-0.025mo1/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)进行梯度洗脱：乙腈：0～5min，70%；5～30min，70%→90%；30～50min，90%。检测波长213nm，流速1.0ml·min-1。结果表明:凝胶样品中莪术醇