尿液有形成分分析的方法学发展

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1、尿液有形成分分析的方法学发展〔摘要〕随着科学技术的日新月异，尿液有形成分的临床检验方法发生了根本性的变化。从过去简单的目测颜色、性状到显微镜检查高倍估计,从干化学的初筛检验到尿液流式细胞仪全自动分析,大大提高了尿液检验速度,而且为尿液有形成分检验标准化奠定了基础。本文就近年来国内尿液有形成分检验中传统显微镜检查和现代干化学分析与流式全自动分析检验的结合在临床上的应用作一综述。　　〔关键词〕尿液；有形成分；显微镜检查；尿干化学；尿流式分析　　1尿液有形成分检测的意义　　在尿液形成过程中，泌尿道常有组织的脱落物和细胞渗出，尿离体离心或自行沉降，其沉降物称为尿沉渣,是尿液中的有形

2、成分，包括细胞、管型、细菌、霉菌、结晶、药物等。尿沉渣检查是尿液分析的重要组成部分，以往直接将尿离心，取沉渣在显微镜下检查，称为“尿沉渣检查”〔1〕，而目前开展的流式原理自动化检查方法，无需离心即可直接分析尿中有形成分，称为尿有形成分分析〔2〕。近年来强调分析尿中所有颗粒，即细胞、管型、细菌、霉菌、结晶、药物等。尿液有形成分分析可确定进入尿路中的细胞种类，如红细胞增多常提示尿路出血，进一步检查红细胞形态则有助于确定血尿来源；白细胞增多则提示尿路感染；不同尿路上皮细胞增多有助于判断各种尿路病变部位。管型增多则提示肾小球肾炎、肾小管(远端，集合管病变)及肾功能减退，所以说尿液有

3、形成分分析可反映泌尿系统各部位的变化，协助对泌尿系统疾病进行诊断、定位、鉴别及预后判断等，为泌尿系统疾病诊断提供可靠依据。难怪有人称尿沉渣检查为“体外无创性肾活检”〔3〕。　　2传统尿液有形成分的检验　　尿液有形成分分析有多种方法，而目前临床常用的包括显微镜检查法、干化学方法和流式细胞法。传统的离心后显微镜检查法,即取混匀的新鲜尿液10ml于一刻度管内，用回转半径15cm的水平离心机以1500r/min(RCF=378G)沉淀5min，取出离心管倾去上层液体使剩约0.2ml，混匀管底沉淀物，用吸管吸出沉淀物的20μl，滴于载玻片上，用盖玻片覆盖后镜检。先用低倍镜(10×10

4、倍)观察全片，再用高倍镜(10×40倍)仔细观察，细胞以高倍镜所见最低和最高数字表示，管型以低倍镜所见最低和最高数字表示〔4〕。这种传统方法受操作者主观影响误差较大，重复性差，判断不标准，不易定量，报告结果不利于临床动态观察，是缺乏标准化的实验方法。　　3干化学对尿液有形成分的初筛　　20世纪80年代,90年代临床上大量使用干化学分析仪方法,尿干化学分析仪对尿中红细胞、白细胞检测是应用化学方法进行的。对尿中白细胞的测定是基于中性粒细胞胞浆内含有酯酶，可催化吲哚酚酯分解出吲哚酚，后者再与重氮盐反应呈现紫色复合物，其颜色深浅与细胞多少呈比例关系，但淋巴细胞不含酯酶，则不与淋巴细

5、胞发生反应。此外高比重尿，尿中含有头孢霉素、庆大霉素、四环素、硼酸、草酸也可致假阴性。尿中含有里甲醛、呋喃坦啶及大量胆红素，氧化型清洁剂则可致假阴性。尿干化学分析仪对红细胞测定是利用血红蛋白(Hb)具有过氧化氢酶样活性，可使过氧化氢茴香素或过氧化氢稀枯分解出〔O〕，后者能氧化色原使其显色，它既可测完整HBC，也可测游离Hb，此法最大问题是受易热酶干扰。在尿液中常存在类过氧化酶性的物质，其具有Hb相同的氧化色原的作用，造成红细胞结果偏高或出现假阳性。对尿中细菌的检测主要基于尿液中细菌能产生的亚硝酸盐含量，只有尿中致病菌含有硝酸盐还原酶时，且尿中含有适量硝酸盐，允许细菌与尿液充

6、分作用(在膀胱停留间隔＞４h)，否则试验将出现假阴性〔5〕。干化学分析仪灵敏度较高，相对特异性较差，假阳性较多，只能作为患者诊断的初筛，不能作为确诊的依据。干化学分析对尿中红白细胞的检查不能代替显微镜，大量的临床试验证明,只有在干化学结果尿蛋白，尿亚硝酸盐，尿白细胞(ex公司生产的UF-50,UF-100尿液分析仪是根据流式细胞术设计的专门用于尿沉渣检查的仪器。该仪器所用尿液不用离心，经荧光染色后，应用鞘流技术将尿中有形成分单个有序通过检测系统。根据检测后发出的荧光强度和在前向角测定的散射激光强度以及脉冲的大小综合分析，报告尿中的有形成分种类和数量，仪器可自动报告红细胞、白

7、细胞、上皮细胞、管型、细菌5个定量参素数，还可测出尿液电导率指标。另外，研究表明，如果采用定量报告方式(C/μl)，最好采用不离心多数量计数法〔9〕。尿液离心镜检是将尿液离心再悬浮后镜检计数的一种方法，可能受到离心部分变形溶解或离心沉淀不完全等因素影响，要比实际理论值明显减低〔10〕。UF－100作为一种尿有形成分流式定量计数仪器，最大检测速度每小时可达到100个样本,用于成形成分快速筛选，进行标本常规定量是适合临床应用的。在大工作量环境下，即保证了检验速度又保证了检测质量，为临床诊断提供了可靠依据〔11〕。　　6