微生物的无菌操作及接种技术

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1、微生物无菌操作技术接种技术工业生产中的微生物接种微生物无菌操作及接种技术一、微生物无菌操作技术无菌操作目的：保证待检物品不被环境中微生物污染；防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀一、微生物无菌操作技术无菌操作材料：接种工具一、微生物无菌操作技术无菌操作材料：材料器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培养皿、无菌水、试管架菌种培养基：二、原理：无菌技术：指在微生物实验工作中，控制或防

2、止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。微生物无菌操作技术与接种技术接种的准备工作无菌环境的要求与保持进入无菌室前的准备无菌操作的要求接种的操作方法二、微生物接种技术无菌环境无菌室超净工作台无菌环境的要求与保持（一）接种的准备工作（1）无菌室的结构：应有更衣间、缓冲间、操作间应有良好的通风条件，安装空调设备及过滤设备无菌环境的要求与保持1、无菌室无菌室的结构（2）无菌室的消毒和防污染无菌室内空气测试应基本达到无菌。每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）.每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小

3、时）.每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖动态。无菌环境的要求与保持2、超净工作台超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护以防污染并保护操作者。原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。无菌环境的要求与保持垂直流超净工作台水平流超净工作台垂直流超净工作台超净台的使用与维护风速保持在0.32-0.48米/秒使用前打开紫外灯照射4

4、0~60min开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭；请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物；使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯；使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15min.定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。无菌环境的要求与保持3、无菌器材准备灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等.消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台等无菌环境的要求与保持（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定；（2）用紫外线灭

5、菌处理30~60min；（3）检查无菌器材是否完备；（4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。（5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、鞋。进入无菌室前的准备（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作；（2）使用玻璃器皿应轻取轻放。（3）在火焰上方操作；（4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；（5）在接种培养物时，协作应轻、准。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。无菌操作要求无菌操作要求无菌操作要求接种的基本程序常用接种方法斜面接种划线接种液体接种穿刺接种（二）接

6、种的操作方法1、接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境操作需在无菌室或超净工作台内进行无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。实验使用的物品使用前后需严格灭菌（二）接种的操作方法2、常用的接种方法斜面接种划线接种液体接种穿刺接种（二）接种的操作方法※斜面接种：从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。用于好气性微生物的接种。2、常用的接种方法标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名点燃酒精灯。接种：（1）手持试管将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在

7、左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。（2）旋松管塞（3）接种环灼烧灭菌※斜面接种※斜面接种（4）拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)※斜面接种（5）取菌:接种环冷却，轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。※斜面接种（6）接种:在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察