无菌操作和接种技术上课讲义.ppt

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1、无菌操作和接种技术4、巴氏消毒法：是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。常用于消毒牛奶和酒类等。来源于巴斯德解决啤酒变酸的问题。当时，法国酿酒业面临着一个令人头疼的问题，那就是啤酒在酿出后会变酸，根本无法饮用。而且这种变酸现象还时常发生。巴斯德受人邀请去研究这个问题。经过长时间的观察，他发现使啤酒变酸的罪魁祸首是乳酸杆菌。营养丰富的啤酒简直就是乳酸杆菌生长的天堂。采取简单的煮沸的方法是可以杀死乳酸杆菌的，但是，这样一来啤酒也就被煮坏了。巴斯德尝试使用不同的温度来杀死乳酸杆菌，而又不会破坏啤酒本身。最后，巴斯德的研究结果是：以50~60℃的温度加热啤酒半小时，

2、就可以杀死啤酒里的乳酸杆菌，而不必煮沸。这一方法挽救了法国的酿酒业。这种灭菌法也就被称为“巴氏灭菌法”。二、灭菌方法1、灼烧灭菌：直接用火焰杀死微生物，适用于微生物实验室的接种针、接种环等接种工具及器皿的灭菌。2、高压蒸汽灭菌（原理：高温使蛋白质和核酸变性）利用适当温度和压力的饱和水蒸汽加热杀灭微生物的一种方法。用于水、培养基、纱布、玻璃器材等耐高温高压潮湿的物品的灭菌3、干热灭菌：是利用干热空气加热杀灭微生物的一种方法（电烘箱），常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。怎样验证培养基的制作是否合格？如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是合格的，否则需要重新制备。

3、1、细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()A．接种环、手、培养基B．高压锅、手、接种环C．培养基、手、接种环D．接种环、手、高压锅C2．据调查，市场上销售的绝大部分鸡蛋都没有经过清洗，更谈不上消毒，表面经常残留羽毛、粪便、饲料等脏物，还可能带有沙门氏菌、大肠杆菌，甚至会造成禽流感病毒传播，美国《蛋制品检查法》将表面污浊的鸡蛋列为“脏蛋”且禁止上市。下列相关叙述错误的是()A．生物学意义上的灭菌、消毒和防止杂菌污染各有不同的含义B．由于鸡蛋、奶等食品中的某些成分不易在高温下被破坏，对其可采取高温灭菌C．巴氏消毒法就是加热到70～

4、80℃，保持15～30min，能杀死一般杂菌和病原菌D．高温灭菌的原理是高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动B3．关于灭菌和消毒理解不正确的是()A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质上是相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用的灭菌和消毒方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法B4、氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表1。(1)配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的________。(2)培养基配制时，灭菌与调pH的先后

5、顺序是________________。(3)从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于________培养基和________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是________。(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为________。琼脂先调PH后灭菌基础选择硝酸铵芽孢(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线(如图2)。从图2可知，SP1菌在________培养条件下最早停止生长，其原因是________________。20mg/L碳源最早耗尽三、分离纯化某种微生物的接种技术-------平板划线法

6、、稀释涂布平板法1、平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落（由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体）。注意　a．划线时最后一区域不要与第一区域相连。b.划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2、稀释涂布平板法注意：接种时每个浓度至少设置3个重复，倒置培养统计菌落时，选菌落数为30～300的一组为代表进行统计每克土壤样品的细菌数＝某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数×稀释倍数。1、通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正

7、确的(　　)A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取10－4、10－5的土壤稀释液0.1mL，分别涂布于各组平板上C．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数D2.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的