资源描述：
《一株菲降解细菌的筛选及其.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、一株菲降解细菌的筛选及其降解条件的优化＊*国家自然科学基金（NO.40476047,40576054）雷欢1黄栩1 田蕴1，**通讯作者E-mail:tianyun@xmu.edu.cn郑天凌1，2(1,厦门大学生命科学学院，福建厦门 361005)（;2厦门大学近海海洋环境科学国家重点实验室,福建厦门 361005)摘要：采用改进的平板升华法从厦门博坦油码头附近海水样品中筛选出一株菲的高效降解菌，经16SrDNA分子鉴定该菌归于鞘氨醇单胞菌属。高效液相色谱分析表明,5天之内该菌降解了81.9％终浓度为400mgL-
2、1的菲，降解速率达到5.95mgL-1h-1。通过均匀设计对该菌降解菲的试验条件进行优化，DPS软件数据处理系统分析表明在接菌量OD6000.5，菲起始浓度为498.46726mgL-1，降解时间为47.09892h时，降解速率最大。关键词：平板升华法；菲；鞘氨醇单胞菌；均匀设计；降解速率1.引言多环芳烃(PAHs)是指2两个或2两个以上苯环的疏水性芳香族化合物。在环境中多数PAHs具有难降解性、致癌性、致畸性和致突变性,受到了广大关注。多环芳烃(PAHs)随三废排入环境中的量逐年增加,造成长期、广泛的污染。菲为三环
3、多环芳烃代表物,生物降解是污染环境中菲去除的主要途径（[3，5，8，11，12，15]韩清鹏等，2003；徐虹等，2004；周乐等，2005；Boldorn,etal.,1993;Choetal.,2001;Goyaletal.,1996）。研究表明鞘氨醇单胞菌属能很好消除PAHs污染[(Choetal.,2001;12，13，Fredricksonetal.,1995;16Kimetal.,2000])，但目前国内报道较少[4，6，7](陶雪琴等，2007；张杰等，2003)。菲的降解已有不少报道,但目前已知的菌株
4、对菲的降解速度不甚理想，作者本研究采用改进的平板升华法从厦门博坦油码头附近海水样品中筛选出一株高效菲降解菌，并对其降解条件进行优化，为进一步探索菲的生物代谢途径乃至在不久将来用于污染环境的生物修复奠定基础。一、2.材料与方法1.2.1材料2.1.1 １）样品2005年9月，采集厦门博坦油码头附近海水样品。2）2.1.2主要试剂菲、芘等PAHs购自Sigma公司，纯度≥≥99％；甲醇、二氯甲烷购于TEDIA（美国）公司，均为HPLC级；碘硝基氯化四氮唑蓝(INT)购自Sigma公司；胰蛋白胨、酵母浸出膏为Difico
5、公司产品。3）2.1.3主要培养基无机盐培养基：(NH4)2SO4，1000mg；Na2HPO4，800mg；KH2PO4，200mg；MgSO4•7H2O，200mg；FeCl3•3H2O，5mg；(NH4)6Mo7O24•4H2O，1mg；CaCl2•2H2O，100mg；蒸馏水1000ml；pH7.2，121℃灭菌，20min。菲-MSM液体培养基：使用时移取一定量的用二氯甲烷溶解的菲母液（10mg/mL）到已灭菌的无机培养基中，待二氯甲烷挥发完全后接菌。LB培养基NaCl，10g；酵母浸膏，5g；胰蛋白胨，1
6、0g；去离子水，1000ml；pH值7.0～7.2。固体培养基，琼脂，1.2-～1.5％。2.22.降解菌的富集培养和驯化（1）2.2.1移取菲母液（10mg/ml）到已灭菌45ml的MSM培养液中，至菲终浓度为400mg/L-1。待二氯甲烷挥发后，加入刚采集回来的海水样品5ml。摇床培养，转速180rpm，温度30℃。之后每隔5天，转接5ml培养液于45ml新鲜的培养液，保持菲的浓度不变，共转接10次。2.2.2改进的平板升华法[10,9]筛选降解菌往500ml的烧杯里添加5ml10mg/ml的菲-二氯甲烷溶液，在
7、通风橱里让二氯甲烷自然挥发。取上述密集驯化后的混合菌系1ml，稀释到适当的浓度后平板涂布。将平板反扣在＊国家自然科学基金（No.40476047,40576054）。通讯作者：E-mail:tianyun@xmu.edu.com.cn。 收稿日期：２００７年１０月２０日。 之后每隔5d，转接5ml培养液于45ml新鲜的培养液，保持菲的浓度不变，共转接10次。(2)改进的平板升华法(仉磊等，2005；Alleyetal.,2000)筛选降解菌。往500ml的烧杯里添加5ml/10mg/ml的菲-二氯甲烷溶液，在通风橱里
8、让二氯甲烷自然挥发。取上述密集驯化后的混合菌系1ml，稀释到适当的浓度后平板涂布。将平板反扣在烧杯口上，用封口膜密封二者接触的地方。，再取一等半径的平皿再取相同半径的平皿，放冰于其上。 94℃水浴5分钟min，取出，冷却，揭膜。将平板置于30℃的培养箱培养过夜，观察菌落的周围是否形成透明圈。2.3.降解能力测定挑取经过纯化的降解菌的单菌落，接种
