一株降解荧蒽的铜绿假单胞菌的分离筛选及其降解特性研究

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1、分类号：Ｑ９３学校代码：１０６９７密级公开学号：２０１２２０８５１ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ士学位论文ＭＡＳＴ＇ＥＲＳＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ一株降解焚慧的铜绿個＾单胞菌的分离歸选及其降解特性研究学科名称：微生物学作者：路薇指导老师：马艳玲副教授西北大学学位评定委员会二〇一五年西北大学学位论文知识产权声明书本人完全了解西北大学关于收集、保存、使用学位论文的规定。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论文被查阅和借阅。本人授权西北大学可以将本学位论文的

2、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。於学位论文作者签名：指导教师签名：系》＿〖ｎ日ｙ年／月丨日广年／月西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西北大学或其它教育机构的

3、学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢Ｊ思、０学位论文作者签名：年／月Ｍ日一株降解焚恵的铜绿假单胞菌的分离蹄选及其降解特性研究中文摘要ｅｃｕｌａｒｗｅｉｈｔ－ｏｌｃｃ焚葱是高分子量多环芳烃（Ｈｉｇｈｍｏｌｇｐｙｙｌｉｃａｒｏｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ，ＨＭＷＰＡＨ一ｓ）的代表之，，广泛分布在环境中也是石油污染土壤中的主要ＨＭＷＰＡＨｓ。由于焚蒽疏水性强，，在环境中稳定性高并且对人体具有致癌的潜在威胁，寻求有效的治理方法将一其从环境中消除便成

4、为当前的项重要任务。在已有的诸多治理方法中，传统的理化方法难以将其彻底分解，、成本低和环境友好的特点，日益受到广泛关注而微生物降解法因高效率。一一本研究对石油污染土样以突蒽进行富集培养，分离得到株能够以焚葱为唯碳源和能源生长良好的菌株，命名为ＤＮ１。通过观察菌落形态、测定其生理生化特征并进行１６ＳｒＲＮＡ基因系统发育分析，初步鉴定该菌株为铜绿假单胞菌（ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｉｎｏｓａ）。测定其最＾Ｐｇ°°３４Ｃ？３７Ｃ５５？７５ＤＮ１在ＢＰＬＭ培养７适生长温度为，最适生长ｐＨ为．．。基内摇瓶培养，２２一天内鼠李糖脂最高产量可达

5、．９／Ｌ，具有良好的产鼠李糖脂能力，这特性有利于荧葱的ｇ增溶、乳化进而促进其生物降解。测定ＤＮ１对荧葱的降解能力，０．５ｇ／Ｌ荧蒽１４天内的降解一率可达到９０．２％，气相色谱检测显示荧惠几乎完全被降解。对ＰＡＨｓ降解的关键酶邻苯二酉分－Ｃ１２０）和二２３－１，２双加氧酶（邻苯酷，双加氧酶Ｃ２３０）进行检测，ＰＣＲ验证基因并测（定在０．２ｇ／Ｌ荧惠中生长的活性变化，发现两种酶的活性均在诱导２４ｈ之后显著升高，且在４８ｈ后显著降低。比较两酶活性，发现Ｃ１２０显著高于Ｃ２３０，表明其在荧惠生物降解的限速反应中起主导作用。采用随机转座突变技

6、术构建ＤＮ１的转座突变体库１２０００余株，并蹄选到与焚惠降解相关的缺陷型突变株１１株。通过随机ＰＣＲ扩增突变株中转座子插入位点邻近序列，测序比对知晓与降解焚蒽相关的基因，已知晓的有：海藻酸盐合成蛋白Ｆｅｉｎ枸；據酸转运蛋白ＦｅｃＡ转运调节蛋白；色氨酸合成酶ａ亚基以及阿糖胞苷ｃｔｏｓｉｎｅａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ；（ｙ，ＡｒａＣ）转录调节子。ＤＮ一１综上所述，，，，是株可以高效降解焚蒽的铜绿假单胞菌生长条件宽松易于培养其良好的降解性能与其优良的产鼠李糖脂能力密切相关。在菌株ＤＮ１降解荧蒽的过程中，双加氧酶Ｃ１２０和Ｃ２３０经诱导后活性

7、双双升高，且Ｃ１２０起主要作用。目前已通过转座突一变获得与焚蒽降解相关的基因，但对于其作用机制还有待进步研究。关键词：铜绿假单胞菌；鼠李糖脂；荧惠；双加氧酶；生物降解ＩＳｔｕｄｙｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａｓｔｒａｉｎＤＮｌｆｏｒｆｌｕｏｒａｎｔｈｅｎｅｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎＡｂｓｔｒａｃｔＦｈｔｔｔｔｌｕｏｒａｎｔｅｎｅｉｓａｍｅｍｂｅｒｏｆｒｅｐｒｅｓｅｎａｉｖｅｈｉｇｈｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇ

8、ｈｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃａｒｏｍａｉ