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1、新型重组免疫毒素DT390作者：贾怡,李虹,陈文捷,吕梅励,李明远,蒋忠华,张林【关键词】实验性变态性脑脊髓炎;,DT390;,mRantes;,重组免疫毒素 PrimarystudyoftherebinantimmunotoxinDT390mRantesinEAEtherapy [Abstract]AIM:ToconstructanoveleukaryoticexpressionplasmidincludingtherebinantimmunotoxinDT390mRantesandtreatexperimental
2、autoimmuneencephalomyelitis(EAE)inmice.METHODS:EAEinC57BL/6miceRantesfragmentidSRαcontainingDT390.ThencationicliposomeembeddedplasmidDNAusclesofthehindlimbsinmice.TheeffectofDT390mRantesptoms,pathologicalchangesofbrain,relativecytokineofperipheralblood,andthepropo
3、rtionofTcellsandBcells.RESULTS:TherebinantimmunotoxinDT390mRantesiceintreatedgroupptomsofEAEmatorycellsmunotoxinDT390mRanteshasdistincteffectsonEAEinmice,aybeusedforbeneficialreferencetothetherapyofMS. [Keyentalautoimmuneencephalomyelitis(EAE);DT390;mRantes;rebin
4、antimmunotoxin [摘要]目的:构建一种含有重组免疫毒素DT390mRantes（白喉杆菌外毒素390片段活化T细胞表达与分泌调节因子）的真核表达质粒,并用于治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）。方法:利用自提的MBP诱导C57BL/6小鼠产生EAE,将mRantes导入含有DT390的真核表达质粒SRα中,经阳离子纳米脂质体包被后,治疗小鼠EAE,同时对其临床症状、脑部病理改变、外周血相关细胞因子及T/B细胞比例进行检测,了解该重组免疫毒素的治疗效果。结果:成功构建真核表达质粒DT390mRantes
5、SRα,治疗组小鼠临床症状减轻,脑部特异性淋巴细胞浸润减少,外周T细胞相关细胞因子表达降低,T/B细胞比例降低。结论:新型重组免疫毒素DT390mRantes治疗小鼠EAE有较为明显的效果,为治疗人的多发性硬化（MS）提供有益的借鉴。 [关键词]实验性变态性脑脊髓炎;DT390;mRantes;重组免疫毒素 人的多发性硬化（multiplesclerosis,MS）是一种难以治愈的以中枢神经系统脱髓鞘病变为主要特征的自身免疫性疾病。实验性动物自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencepha
6、lomyelitis,EAE）,又称为实验性变态反应性脑脊髓炎（experimentalallergicencephalomyelitis）与MS在临床表现、生化指标及病理等方面均具有很多相同之处,常被作为MS的理想动物模型[1]。在EAE中,T细胞被自身抗原如髓鞘素碱性蛋白（myelinbasicprotEin,MBP）[2]、蛋白脂蛋白（proteolipidprotEIn,PLP）[3]、少突胶质细胞糖蛋白（myelinoigodendrocyteglycoprotein,MOG）[4]、髓鞘素结合糖蛋白（MAG）等
7、活化而进入中枢神经系统产生炎性反应。本实验中将活化T细胞表面受体CCR5的配体Rantes（regulatedonactivationnormalTcellsexpressedandsecreted）[5]与修饰的白喉杆菌外毒素DT390相连,构建一种新型的重组免疫毒素核酸制剂DT390mRantes。用其定向杀伤活化的自身反应性T细胞,并检测该重组免疫毒素对EAE的治疗作用。 1材料和方法 1.1材料C57BL/6雌性小鼠48只,6~8周龄,质量13~18g,购自四川大学华西实验动物中心。新鲜牛脊髓,福氏完全佐剂（F
8、CA,内含结核分枝杆菌5g/L）为四川大学基础医学与法医学院免疫学教研室馈赠。灭活的百日咳杆菌菌液[内含百日咳杆菌（3～9）×109/L]为成都市生物制品研究所产品。真核表达质粒SRα（内含DT390片段）为美国BP粗提物的提取与鉴定参照Kies法[6]加以改进从新鲜牛脊髓中提取MBP粗提物,在UV26
