五味子水溶性多糖提取及纯化工艺的优化

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1、五味子水溶性多糖提取及纯化工艺的优化作者：姜波，孙静，刘春，范圣第【摘要】　　目的研究五味子多糖提取工艺参数及参数的评价方法。方法用水提取醇沉法提取五味子多糖，通过单因素及正交实验，研究固液比、提取温度、提取时间及提取次数对五味子多糖得率的影响，并对多糖得率的质量评价和含量评价方法进行探讨，同时进行了多糖的纯化研究。结果提取温度对五味子多糖得率的影响最大，固液比、提取时间对五味子多糖得率影响较小。通过测定提取的多糖含量计算五味子多糖得率与单纯用多糖质量（所得沉淀）计算的五味子多糖得率的比较存在一定的差异，表明采用

2、含量测定的方法比单纯的质量比所确立的条件更准确。结论五味子多糖提取的最佳工艺条件为：固液比1∶30，提取温度90℃，提取时间4h，提取3次。用活性炭与Sevage法联合使用纯化多糖，使提取的多糖纯度由43.48%提高到66.43%。【关键词】五味子多糖提取纯化　　五味子为木兰科植物五味子的果实，因其甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故得名五味子。五味子是名贵中药材，《本草纲目》中记载，五味子益气主治，咳逆上气，劳伤羸瘦，补不足，强阴，养五脏，除热，止呕逆，补虚劳，明目，壮筋骨，除烦热，解酒毒，生津止渴，补元气不足等［1

3、］。临床多用于久咳虚喘、津亏口渴、遗精、自汗、久泻、神经衰弱、肝炎等症［2］。近年来通过大量动物和临床实验发现，五味子还具有保肝、抗衰老、耐缺氧、增强机体免疫力等活性［2，3］。　　近年来研究发现活性多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降血糖、解毒、抗辐射等功效［4～8］，其作用日益受到人们的重视。本文利用对环境无污染的水提取的方法，研究了五味子多糖的提取工艺条件，并进行了粗多糖的纯化及多糖含量的测定。在人们常采用的通过依据提取多糖质量的多少（所得的多糖沉淀的质量除以样品的质量）来判断提取工艺条

4、件［9～11］的同时，本文又通过测定提取的多糖中的多糖含量（测得的多糖含量乘以提取多糖质量除以五味子的质量）来选择多糖的提取条件，并将两种方法进行了比较。实验结果表明，采用含量测定的方法比单纯的质量比所确立的最佳条件更可靠。　　1仪器与材料　　1.1仪器与试剂　　　in离心20min，所得提取液浓缩至原体积的约1/5，然后加入5倍体积的乙醇，摇匀后，在4℃冰箱中放置24h，以4200r/min离心18min。所得沉淀蒸干乙醇后，在70℃烘箱中烘至干燥，所得固体即为五味子多糖。　　2.3粗多糖的纯化方法　　五味子预

5、处理→蒸馏水浸提→离心→浓缩→Sevage法脱蛋白→活性炭脱色→醇沉→离心→干燥→研磨干燥→检测。　　质量比多糖得率（%）=提取的多糖质量五味子试样质量×100%　　为了便于区分这个得率以下称为质量比多糖得率。　　2.4多糖的含量测定方法采用硫酸-苯酚法，用葡萄糖作为标准测定多糖含量。　　标准溶液的配制及测定：准确称取0.10000g已干燥的标准葡萄糖，溶解后至100ml容量瓶，用蒸馏水稀释到刻度。用移液管分别取上述配制的葡萄糖标准溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，转移至100ml容量瓶，并用蒸馏水

6、稀释至刻度，摇匀。得浓度分别为10，20，30，40，50μg/ml的葡萄糖标准溶液。　　从上述已配制的葡萄糖标准溶液中分别取出0.6ml于10ml具塞试管中，再分别加入5％苯酚（l，迅速加入浓硫酸4.0ml，摇匀，室温静置15min,30℃水浴中放置15min，在486nm下测其吸光度。　　样品溶液的配制及测定：准确称取0.01g粗多糖，用蒸馏水溶解后，分别转移至50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用与标样测定相同的方法测定样品中多糖含量。　　通过标准曲线测得样品浓度后带入以下公式可得到0.01g粗多糖

7、中多糖含量，再乘以粗多糖干燥后产量可得到2g五味子中粗多糖量，最终可算出五味子多糖得率。　　多糖含量（%）=样品浓度×稀释倍数×样品体积多糖试样质量×100%　　五味子多糖得率（%）=粗多糖多糖含量×粗多糖质量五味子试样质量（2g）×100%　　2.5单因素实验固液比(m/v)选用1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50五个条件，提取温度采用75，80，85，90，95℃5个条件，提取时间为1，2，3，4，5h5个条件，提取次数为5次。　　2.6正交实验选L9（33）正交实验，以确定五味子中水溶性多糖提取

8、的最佳工艺参数。水平因素见表1。表1水平因素（略）　　3结果与讨论　　3.1多糖含量的测定　　经紫外光谱扫描确立多糖测定的最大吸收为486nm，测得的葡萄糖标准曲线的相关系数为0.9996，线性方程为Y=0.0069X。　　3.2五味子多糖提取的单因素实验研究　　为了更准确地反映出提取多糖的量，本文除了采用人们普遍使用的直接利用提取的多糖质量与试样质量之比的多糖得率计算方